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人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

糖化酶的生产流程设计方案(共6页)

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人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

糖化酶的生产流程设计方案

糖化酶即葡萄糖淀粉酶(1,4-α-葡聚糖葡聚糖水解酶,

EC.3.2.1.3),是淀粉糖化工艺的主要酶类,被广泛地应用于

食品、医药、发酵等工业。目前,糖化酶的生产菌种主要为

黑曲霉。根据使用的生产菌种不同及发酵工艺不同,工业

生产中,糖化酶的发酵生产水平在35000～55000UPmL不等。

糖化酶的工业化生产从过去的固体发酵沿革到上世纪90年

代初,液体发酵工艺逐步取代了原固体发酵工艺。液体发酵

工艺的建立与应用极大地改善了发酵产品质量并大幅度提升

了糖化酶的发酵生产水平。但现有糖化酶发酵生产技术共同

存在不足之处,其中种子制备周期和发酵生产周期很长是一

个较突出的问题,如实验室的种子制备需要15d以上,发酵周

期通常200h以上。

生产流程图

一、试验菌种的分纯

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1、培养基

（1）固体培养基，察氏培养基+1％酵母膏+1％蛋白胨；（2）初筛

培养基，玉米粉：麸皮：米糠：硫酸胺=7:3:2:（3）诱变后培

养基，玉米粉：麸皮：米糠：硫酸胺=8：3::2:，水80ml。

（2）原料：玉米粉、麸皮等

（3）菌种分纯

将麸皮采集菌种取出一部分，置入装有10mL生理盐水和若干

-1-

玻璃珠的小三角瓶内，振荡15分钟，将上清液一次稀释成10、10

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、10，各取做平板划线，29℃培养5~6天，分别挑取单个菌落接

入斜面，29℃培养一周。

以大连某厂的生产用菌B-11为对照，对分离菌株做摇床发酵试

验，96h后测定糖化力，配合镜检，确定诱变的出发菌株。

二、试验菌株的诱变

用生理盐水洗下成熟出发株的孢子、倒入5mL麦汁种1％酵

母膏的三角瓶中，振荡，使孢子活化，后3500r/min.离心分离15分

钟，用磷酸缓冲液洗涤一次，再用缓冲液5ML洗转入小三角瓶内

（内有数枚无菌玻璃珠），振荡10分钟，使孢子分散均匀，过滤，

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制成单孢子悬浮液，将浓度调至10个/ml

取10ml孢子悬浮液于9cm平板中，紫外线（UV）照射诱变

2分钟（避光操作），紫外线动率15W，室温，搅拌，照射距离

30cm。

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向经紫外线处理的菌液中加入硫酸二乙酯（DES）稀液（原液

1ml，95％乙醇4ml配制），32℃恒温处理15分钟，不断摇动平

-2-3

皿，处理后立即稀释至10、10（中