第二章仪器鉴别法2ppt课件.pptxVIP

主讲人：沈晓君;;

有机药物分子中含有共轭结构，生、助色基团而显示特征吸收光谱，可作为鉴别的依据。

光谱简单，专属性差。;;紫外光谱的特征;常用的方法有：

★对比法：测定供试品的吸收光谱或规定的信息参数对比；或与对照光谱及特征参数对比；

★测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；

★规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度；

★规定吸收波长的吸收系数法；

★规定吸收波长的吸收度比值法；

★经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。

以上方法可以单个应用，也可几个结合起来使用，以提高方法的专属性。;安宫黄体酮(M=386.53);三种甾体激素的紫外吸收光谱

(10?g/ml甲醇溶液）;紫外-可见分光光度计的主要部件;

专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）。

主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于结构复杂、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。

;;（1）试样制备方法;糊法;;（2）应用光谱图对照时应注意的问题：

1）由于晶型的影响，致使录制的光谱图与光谱集所收载的光谱图不一致，应按光谱集中各相应光谱图中备注的方法进行预处理后，再行录制。

分别按同晶型对照的图谱比较同质异晶现象的药品。;2）采用压片法时，若样品（包括盐酸盐）与溴化钾之间不发生离子交换反应，则采用溴化钾作为制片基质。否则，盐酸盐样品制片时必须使用氯化钾基质。

3）测定时应注意二氧化碳和水汽（3440cm-1及1630cm-1）等的大气干扰，必要时，应采取适当措施（如采用干燥氮气吹扫，真空）加以改善。;4）仪器间分辨率的差异及不同的操作条件（如狭缝程序，扫描速度等）可能影响药品光谱图的判断。

需用在比较样品的光谱图前，首先比较聚苯乙烯薄膜的光谱图。

5）本法对于多组分药物或存在多晶现象而又无可重复转晶方法的药物不适用。;;;2.高效液相色谱和气相色谱法

一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。

内标法时，要求药物与内标物峰的保留时间比值也应相同。;;液相色谱仪;HPLC流程及主要部件;2.主要部件;(2)梯度淋洗装置;(3)进样装置;(4)高效分离柱;(5)液相色谱检测器;b.荧光检测器

;流动相类别;流动相选择;常用溶剂的极性顺序：

水(最大)甲酰胺乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮二氧六环四氢呋喃甲乙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚异丙醚二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)

;选择流动相时应注意的几个问题;气相色谱法;工作流程示图;1.仪器分析应用数量增加，尤其是红外光谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。

2.制剂广泛采用IR法鉴别。与原料药相比，制剂需先分离再压片绘制图谱。;鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。影响鉴别反应的主要因素有被测物浓度，试剂的用量，溶液的温度、pH，反应时间和干扰物质的存在等。;（一）反应灵敏度和空白试验

在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度（sensitivity）。它以两个相互有关的量来表示：

;最低检出量（又称检出限量）（以m表示），就是应用某一反应，在一定的条件下，能够观测出试验结果的供试品的最小量，其单位通常用微克（μg）表示。

最低检出浓度（又称界限浓度），是应用某一反应，在一定条件下，能够观测出供试品的最低浓度，通常以1:V(或1:G）表示，其中V(或G)表示含有1g重某供试品的溶液的毫升（或克）数。;影响条件：

1.在选用灵敏度很高的反应时，必须采用高纯度的试剂，非常洁净的器皿，才能保证鉴别试验结果的可靠性。

2.为了消除试剂和器皿可能带来的影响，应同时进行空白试验（blanktest)以供对照。

空白试验，是在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。

3.与分析方法、观察方式、反应条件、人的观察能力等因素有关。;（二）提高反应灵敏度的方法