高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸.pptVIP

高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸

一资讯阶段1、为什么要测定饮料中苯甲酸含量苯甲酸具有抑制细菌生长和繁殖的作用，广泛应用于食品工业中作为防腐剂。但是苯甲酸的过量摄入，可对人们的健康造成危害：如苯甲酸进入人体后，在肝脏内与甘氨酸结合，代谢成马尿酸由尿排出，对肝脏造成一定的损害；同时口服过多的苯甲酸，在体内积蓄过多会对身体造成一定的危害。国家限定碳酸饮料中苯甲酸的浓度不得超过0.07mg/ml,由于苯甲酸价格低廉在食品工业中得到广泛的应用，因此有必要测定饮料中苯甲酸含量。2、测定苯甲酸的常用方法及比较（1）紫外分光光度法原理：样品中苯甲酸在酸性溶液中可以用水蒸汽蒸馏的方法蒸馏出来，与样品中不挥发性成分分离，然后用强酸氧化，使苯甲酸以外的其它有机物氧化分解，氧化后的溶液再次蒸馏，蒸馏液中除苯甲酸外的其它杂质基本都被分解了，根据苯甲酸的吸收波长225nm下测定吸光度。（2）气象色谱法原理：用乙醚提取后，采用氢火焰离子检测器进行分离测定，然后与标准系列比较定量。2、测定苯甲酸的常用方法及比较（3）高效液相色谱法原理：样品加热除去二氧化碳和乙醇，调ph至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反向色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。（4）薄层色谱法原理：样品经过酸化后，用乙醚提取苯甲酸，然后将样品浓缩，浓缩后点样于聚酰胺薄层板上，经展开，显色后，根据比移值与标准比较定性，并进行定量。2、测定苯甲酸的常用方法及比较（5）滴定法

原理：在弱酸条件中，用乙醚将样品中的苯甲酸提取出来，将乙醚挥发后，用中性酒精或醇醚混合物溶解内容物，用酚酞做指示剂，采用0.1N标准NaOH滴定至终点，然后根据氢氧化钠消耗的体积计算苯甲酸或苯甲酸钠的含量。根据以上几种方法，滴定法是应用最广泛的，但准确度不是很高；而气象色谱法从仪器、试剂等各方面考虑比较昂贵，不是常用；薄层色谱法也不常用；紫外分光光度法准确度也不是很高，在特殊情况下才会使用；所以。一般都采用高效液相色谱法，3、为什么要选择液相色谱方法？高速：HPLC采用高压输液设备，流速大大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g,荧光检测器——10-11g所以选择HPLC，并且，HPLC在工业、科学研究，尤其是在生物学和医学等方面应用极为广泛。如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的。4、液相色谱的结构一流路系统：流动相、管路、泵、混合器、脱气机等组成二进样系统：手动进样,自动进样三分离系统：预柱（又叫保护柱）、色谱柱,柱温箱四检测系统：各种检测器五数据处理系统：工作站5、分离原理液相色谱是利用组分在两相间分配系数不同进行分离高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。6、如何定性，如何定量1、定性分析：在确定的色谱分离条件下，苯甲酸有一定的保留时间，在相同的实验条件下，分别测定苯甲酸纯物质和饮料样品中各组分的保留值，将两者进行对比，就可确定饮料中何种组分为苯甲酸，对其进行定性。2、定量分析：由于不同饮料样品中苯甲酸的含量不同，其峰面积也不相同，因此可以利用峰面积与含量的对应关系，计算饮料样品中苯甲酸的含量。即先配制标准浓度的苯甲酸,定量进样，由被测组分和标准组分的峰面积比来求得被测组分的浓度。计算公式下：式（1）中：Ci为样品浓度，mg/ml;Cs为标准品浓度，mg/ml；Ai为样品峰面积；As为标准品峰面积。二、决策阶段1、实验原理样品加温处去二氧化碳和乙醇，调节pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后根据保留时间和峰面积进行定性和定量。2、试剂和仪器甲醇：经0.5um滤膜过滤氨水：1+1乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜（0.45um）过滤。碳酸氢钠溶液（20g/L）：称取2g碳酸氢钠（优级纯），加水至1000mL，震摇溶解。苯甲酸标准储备液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶，加