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附录C

（规范性）

抗菌性能试验方法

C.1概述

通过将抗菌材料与菌液接触一定时间，通过测定菌液中残留活菌含量，计算材料的抗菌率。

C.2试验环境

试验采取无菌操作技术，实验室环境应符合GB19489《实验室生物安全通用要求》

C.3试验菌种和仪器

C.3.1试验用菌

——大肠杆菌Escherichiacoli（CGMCC1.90，8099）

——金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus（CGMCC1.89，ATCC6538）

根据试验要求也可选用其他种类的微生物。菌种或菌株应由国家相应菌种保藏管理中心提供并在报告中标明试验用菌品种及分类号。

C.3.2菌种活化

将标准试验菌株接种于营养琼脂（NA）斜面培养基上，在（37±1）℃条件下培养24h后，在5℃~10℃下保藏（不得超过1个月），作为斜面保藏菌。

将斜面保藏菌转接到营养琼脂（NA）培养基上，在（37±1）℃条件下培养（24±1）h，每天转接1次。试验时应采用3～5代、24h内转接的新鲜细菌培养物。

C.3.3仪器

——恒温恒湿培养箱：温控最大允许误差±1℃;

——冷藏箱：5℃~10℃;

——生物安全柜

——自动蒸汽灭菌锅

——天平，精确度为0.001g

——pH计

——培养皿、试管、移液管（最大允许误差±0.01mL）、接种环、酒精灯等。

C.4试验准备

C.4.1细菌预培养

用无菌接种环将细菌从保藏菌种的培养基上转移至斜面培养基上，于（35±1）℃培养（24±2）h后，再转接至新鲜的斜面培养基上，（35±1）℃培养20h。

C.4.2接种液的制备

配制浓度为1/500的NB溶液，分装至有玻璃珠的无菌小玻璃瓶，灭菌冷却后使用。

使用无菌接种环，转移1~2环新鲜细菌培养物至盛有20mL1/500NB溶液的小玻璃瓶中，放入恒温

摇床中150r/min震荡培养1.5h，确保细菌分散均匀，用1/500NB溶液调节菌液浓度在（2.5~10）×105CFU/mL范围内，即为试验接种液。

C.4.3试样的准备

试验样本：抗菌材料的样品3片，裁剪成（50±2）mm×（50±2）mm，厚度不超过10mm。

对照样本：未经抗菌处理的样品6片，裁剪成（50±2）mm×（50±2）mm，厚度不超过10mm。聚乙烯覆盖膜，尺寸为（40±2）mm×（40±2）mm薄膜。

将裁剪好的试样样片及覆盖膜紫外照射30min。

C.5试验过程

C.5.1试样接种

将处理好的试验样本和对照样本分别放置在无菌平皿中，测试面朝上，用移液器吸取0.4mL菌液滴到每个试样表面，将覆盖膜盖于接种好的菌液上，并向下轻轻按压薄膜使菌液向四周扩散，确保菌液未从薄膜边缘溢出，在试样接种完并盖上薄膜后，盖上皿盖。

C.5.2“0”时刻对照样本即时回收

接种结束后，选择3片对照样本立即进行回收，在各培养皿中分别加入10mLSCDLP培养液进行充分冲洗，即用移液器吸取和释放SCDLP溶液，冲洗试样4次以上。

用0.03mol/L的PBS溶液对回收液进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释度的稀释液，取1mL分别加入无菌培养皿中，注入15ml左右的平板计数琼脂，轻摇以分散细菌，冷却后倒置培养皿，于（35±1）℃培养（24±2）h。按照GB4789.2的方式进行菌落计数。

C.5.3试验抗菌培养后回收

将装有试样的培养皿放入（35±1）℃、湿度不低于90%RH的恒温恒湿培养箱中培养（8±2）h，分别于抗菌培养（8±2）h后，各取出3片对照样本和3片试验样本，按照C.5.2中的方式进行回收、培养，按照GB4789.2的方式进行菌落计数。

C.5.4阴性对照

分别吸取试验同批次的PBS溶液、培养基，加入至培养皿内，冷却凝固后在相同条件下进行培养。

C.6有效性判定：

1）“0”时刻对照样本即时回收的活菌数应在（1~4）×104CFU/mL；阴性对照无菌生长。

2）对照样本不应有明显的抗菌作用，对照样本回收菌落数不应低于“0”时刻对照样本回收菌落数的10%，否则试验无效。

C.7计算：

按照公式C.1计算抗菌率

R=AB×100%……（C.1）

式中：

R—抗菌率；

A—对照样本平均回收的活菌数，CFU/mL；

B—试验样本平均回收的活菌数，CFU/mL