实验一简单染色3ppt课件.pptxVIP

微生物学实验

余雪冰

实验一

显微镜的使用和细菌的简

单染色

实验目的

显微镜介绍

实实验原理油镜的使用原理

验染色原理

内实验材料

容

显微镜的使用

实验程序

细菌简单染色的流程

作业

实验目的

•了解光学显微镜的构造并掌握其使用方法，

重点掌握油镜的使用方法

•掌握简单染色的原理及方法

•学习并掌握无菌操作技术

绍

介

镜

微

显

—

—

•普通光学显微镜(NIKO理N)

原

欧林巴斯（）生物显微镜

•OLYMPUS验

实

•麦克奥林生物显微镜

镜座

载物台

镜臂

机械装置标本夹和标本移动尺

显粗调螺旋和细调螺旋

微

镜聚光镜升降螺旋

的

构接目镜

造

接物镜及镜头转换器

光学系统聚光镜

虹彩光圈

反光镜

实验原理－染色剂和染色原理

•由于微生物细胞含有大量水分（一般在80-90%以上），对

光线的吸收和反射与水溶液的差别不大，与周围背景没有

明显的明暗差。所以，除了观察活体微生物细胞的运动性

和直接计算菌数外，绝大多数情况下都必须经过染色后，

才能在显微镜下进行观察。但是，任何一项技术都不是完

美无缺的。染色后的微生物标本是死的，在染色过程中微

生物的形态与结构均会发生一些变化，不能完全代表其生

活细胞的真实情况，染色观察时必须注意。

•微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而

进行的。物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、

渗透、吸附作用等。化学因素如：正负离子之间的相互吸

引等。

回目录页

实验原理－染色剂和染色原理

•染色剂染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型：1.酸

性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。2.碱性

染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫

等，细菌易被碱性染料染色。3.中性（复

合）染料：如伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于细胞核

染色）。4.单纯染色：这类染

料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，

如苏丹类（Sudanb)的染料。

•细菌的等电点较低，pH值大约在2—5之间，故在中性、碱性

或弱酸性溶液中，菌体蛋白质电离后带阴电荷；而碱性染料电

离时染料离子带阳电。因此，带阴电的细菌常和带阳电的碱性

染料进行结合。所以，在细菌学上常用碱性染料进行染色。

实验原理－染色剂和染色原理

微生物染色常用染料如下表：

实验原理－细菌的三种基本形态

球菌（Sphericalcoccus）:包

括双球菌、链球菌、葡萄球菌、四链

球菌、八叠球菌等

杆菌(Rod-shapedbacillus)：短

小、粗大、细长、棒状、分支

螺旋菌(Spired-shapedspirallum)：弧

菌、螺菌

球菌

肺炎链