免疫检测常用方法及运用秦伟.pptVIP

用特异性抗体进行包被和制备酶标抗体，以检测相应的抗原。乙肝标志物中HBsAg、HBeAg的检测常采用本法0102ELISA—双抗体夹心法ELISA—双抗体夹心法ELISA—双抗体夹心法01020304用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。抗HBs的检测抗HCV的检测抗HIV的检测ELISA—双抗原夹心法ELISA—双抗原夹心法ELISA—竞争法标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。如受检标本中无抗体，则酶标抗体能顺利地与固相抗原结合。加入酶标抗原后就显色深。如受检标本中含有抗体，则与酶标抗体以同样的机会与固相抗原结合，竞争性地占去了酶标抗体与固相抗原结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。加入酶标抗原后就显色浅或不显色。ELISA—竞争法最常见的应用：01乙肝HBeAb、HBcAb检测02ELISA—竞争法将抗人IgM抗体（抗人IgMμ链抗体）连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。01加入标本，IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他抗体。加入特异性抗原试剂，它只与固相上的特异性IgM结合，洗涤。加入针对特异性抗原的酶标抗体，形成固相二抗—IgM抗体—抗原—酶标抗体复合物。加底物显色，如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。02030405ELISA—捕获法ELISA—捕获法以优生四项IgM抗体检测为例ELISA—捕获法甲肝IgM抗体测定ELISA总结酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性，几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它的最小可测值达ng甚至pg水平。酶免疫测定标记试剂比较稳定，且无放射性危害。因此，酶免疫测定的应用日新月异，酶免疫测定的新方法、新技术不断发展。利用微孔膜（主要是醋酸纤维素膜）作为固相进行免疫检测的方法01根据标记物的不同分为两类：02酶标固相膜免疫测定：酶免疫斑点法酶免疫印迹法03金标法：胶体金斑点渗滤试验胶体金免疫层析试验04固相膜免疫测定酶标固相膜免疫测定原理酶免疫斑点法logo常应用于自身抗体的检测免疫检测常用方法及应用肥城市人民医院检验科秦伟免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、补体、细胞因子等免疫相关物质及微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素、毒品等试验方法。这些方法所具有的特异性好、敏感性高、简单、快速和稳定的特点为临床上确定诊断、分析病情、调整治疗方案和判断预后等提供有效的实验依据，使它们在临床的应用进一步普及和推广。凝集反应(agglutination)颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的抗体，或可溶性抗原(亦可用抗体)吸附于与免疫无关的载体形成致敏颗粒与相应的抗体(或抗原)，在有适量电解质存在下，形成肉眼可见的凝集小块。直接凝集反应01间接凝集反应02抗人球蛋白试验（Coombs试验）03凝集反应的分类颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的抗体在有适量电解质存在下，形成肉眼可见的凝集小块。01常见的应用是血型的鉴定02直接凝集反应血型鉴定示意图间接凝集反应将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小颗粒性载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性凝集的现象称间接凝集反应（indirectagglutination）或被动凝集反应（assiveagglutination）。间接凝集反应常用的载体微球有人O型血红细胞、绵羊或家兔红细胞、聚苯乙烯乳胶、活性炭/甲苯胺红、明胶颗粒等正向间接凝集反应1反向间接凝集反应2间接凝集反应正向间接凝集反应用抗原致敏载体以检测标本中的相应抗体正向间接凝集反应

—胶乳凝集试验030201所用载体颗粒为羧化的聚苯乙烯胶乳，是一种直径约为0.8μm大小的圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子。将溶血素O吸附在羧化的聚苯乙烯胶乳颗粒上检测抗”O”。将变性IgG包被于羧化的聚苯乙烯胶乳颗粒上检测RF。正向间接凝集反应

—RPR/TRUST试验01所用载体颗粒为活性炭颗粒血浆反应素试验(RPR)02（TRUST）所用载体颗粒为甲苯胺红颗粒甲苯胺红不加热血清反应素试验正向间接凝集反应

—RPR试验正向间接凝集反应

—TRUST试验2—明胶颗粒凝集试验3所用载体为人工合成的惰性明胶颗粒1正向间接凝集反应5肺炎支原体抗体检测（MP-Ab）4梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）正向间接凝集反应

—TPPA试验正向间接凝集反应

—TPPA试验正