第1节位点特异性重组ppt课件.pptxVIP

第六章位点特异性重组和DNA转座;Introduction

保守性位点特异性重组（conservativesite-specificrecombination,CSSR）

转座重组（transpositionalrecombination）;1.保守性位点特异性重组（CSSR）;1.保守性位点特异性重组（CSSR）

1.1重组位点;1.保守性位点特异性重组（CSSR）

1.1重组位点

①重组酶识别序列对称分布

②交换区（crossoverregion）;1.保守性位点特异性重组（CSSR）

1.2重组结果

③DNA片段的到位;1.保守性位点特异性重组（CSSR）

1.2重组结果

①DNA片段的插入

②DNA片段的缺失

③DNA片段的到位;1.保守性位点特异性重组（CSSR）

1.3重组酶

1.3.1丝氨酸重组酶

1.3.2酪氨酸重组酶;1.保守性位点特异性重组（CSSR）

1.3.1丝氨酸重组酶

1.3.1.1结构;1.3.1丝氨酸重组酶

1.3.1.2功能

①重组酶丝氨酸残基的-OH攻击交换区特定磷酸二酯键，重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连

②另外一个断裂DNA的-OH攻击重组酶与DNA磷酸二酯键，重新形成DNA的磷酸二酯键，丝氨酸重组酶释放DNA;1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能

①丝氨酸重组酶的4个亚基分别切断2个DNA分子的4条链，并且重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连;1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能

②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换;1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能

②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换;1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能

③DNA链上-OH攻击重组酶-DNA磷酸二酯键，重新形成DNA磷酸二酯，释放重组酶，完成重组;1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能

①丝氨酸重组酶的4个亚基分别切断2个DNA分子的4条链，并且重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连

②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换

③DNA链上-OH攻击重组酶-DNA磷酸二酯键，重新形成DNA磷酸二酯，释放重组酶，完成重组;总结

重组位点

重组结果

丝氨酸重组酶;2.转座;2.转座

2.1转座因子（transposableelement）或转座子（transposon）

从DNA上的一个地方移位到另外一个地方的遗传因子。;2.2转座因子的类型

2.2.1DNA转座子

2.2.2LTR(longterminalrepeat)反转录转座子

2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反转录转座子;2.2转座因子的类型

2.2.1DNA转座子

2.2.1.1自主转座子（autonomoustransposon）

2.2.1.2非自主转座子（nonautonomoustransposon）;2.2转座因子的类型

2.2.1.1DNA自主转座子

①反向重复序列（具有转座酶识别序列）

②转座酶基因;2.2转座因子的类型

2.2.1.2DNA非自主转座子

①反向重复序列（具有转座酶识别序列）;2.2转座因子的类型

2.2.1DNA转座子

2.2.1.1自主转座子

①反向重复序列（具有转座酶识别序列）

②转座酶基因

2.2.1.2非自主转座子

①反向重复序列（具有转座酶识别序列）;2.2转座因子的类型

2.2.2LTR反转录转座子

①两端有LTR(longterminalrepeat)

②LTR中含有反向末端重复序列

③转座酶基因和反转录酶基因;2.2转座因子的类型

2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反转录转座子

①5′-UTR:untranslatedregion

②3′-UTR(聚腺苷酸序列的A-T碱基对)

③ORF1:编码RNA结合蛋白openreadingframe

④ORF2:编码的蛋白质同时具有反转录酶和核酸内切酶功能;2.3DNA转座的剪切-粘贴机制

①转座酶识别并聚集转座子两端的反向重复序列，形成转座体

②将DNA转座子从原始位置切除

③DNA单链交换，即转座子的3′-OH与靶DNA的5′-P相连

④DNA聚合酶和DNA连接酶修复缺口;2.3DNA转座的剪切-粘贴机制

①转座酶识别并聚集转座子两端的反向重复序列，形成转座体;2.3DNA转座的剪切-粘贴机制

②将DNA转座子从原始位置切除;2.3DNA转座的剪切-粘贴机制

③DNA单链交换，即转座子的3′-OH与靶DNA的5′-P相连;2.3DNA转座的剪切-