DB33T 822-2011 高致病性猪蓝耳病RT-PCR检测技术　　.docxVIP

ICS11.220B41

DB33

浙江省地方标准

DB33/T822—2011

高致病性猪蓝耳病RT-PCR检测技术

RT-PCRdetectiontechniqueforhighlypathogenicporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus

2011-03-25发布2011-04-25实施

浙江省质量技术监督局发布

DB33/T822—2011

I

前言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》和GB／T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的规定编写。

本标准由浙江省农业厅提出。

本标准由浙江省畜牧兽医标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：浙江省动物疫病预防控制中心、中国动物卫生与流行病学中心。

本标准起草人：徐辉、李晓成、吴发兴、赵灵燕、张燕霞、倪柏锋、周彩琴、陆国林、吴赟竑、陈星宇、王燕萍、周蕾。

DB33/T822—2011

1

高致病性猪蓝耳病RT-PCR检测技术

1范围

本标准规定了高致病性猪蓝耳病病毒RT-PCR检测技术。

本标准适用于猪只感染高致病性和美洲型经典猪蓝耳病病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。3.1

高致病性猪蓝耳病highlypathogenicporcinereproductiveandrespiratorysyndrome

简称HP-PRRS，是由猪繁殖与呼吸综合症（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS）（俗称蓝耳病）病毒变异株引起的一种猪的急性高致死性疫病。临床上表现为体温明显升高，可达41℃以上，眼结膜炎、眼睑水肿，咳嗽、气喘等呼吸道症状；部分猪出现后躯无力、不能站立或共济失调等神经症状。PRRSV是套式病毒目、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属成员。

3.2

逆转录-聚合酶链反应reversitranscriptasepolymerasechainreaction，RT-PCR

将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。

4缩略语

下列缩略语适用于本标准。

bpbasepair，碱基对。

DNAdeoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸。

dNTPsDeoxyribonucleosideTriphosphates，脱氧核糖核苷三磷酸。

IFAimmunofluorescenceassay，免疫荧光测定。

PCRpolymerasechainreaction，聚合酶链式反应。

RT-PCRreversetranscriptionPCR，反转录PCR。

Taq酶TaqDNAPolymerase，TaqDNA聚合酶。

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2

DEPCdiethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯。EBEthidiumbromide，溴化乙锭。

5检测方法

除另有规定外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水均为蒸馏水，规格符合GB/T6682的相关规定。

5.1试剂

5.1.1变性液:见附录A.1。

5.1.22mol/L醋酸钠溶液(pH4.0)：见附录A.2。

5.1.3水饱和酚（pH4.0）。

5.1.4氯仿/异戊醇（49/1）混合溶液。

5.1.5AMV反转录酶（200U/μL）。

5.1.6RNA酶抑制剂(40U/μL)。

5.1.7TaqDNA聚合酶(5U/μL)。

5.1.81.0%琼脂糖凝胶：见附录A.3。

5.1.950×TAE缓冲液：见附录A.4。

5.1.10EB溶液(10μg/μL)：见附录A.5。

5.1.11加样缓冲液：见附录A.6。

5.1.12DEPC处理的灭菌双蒸水：见附录A.7。

5.1.13异丙醇。

5.1.14DEPC