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辅助保护胃粘膜检验方法

1动物实验

1.1原理

在一定时间内给予一定量的受试样品，用对胃粘膜有损伤作用的物质造成急性胃粘膜损伤模型，观察各剂量组胃粘膜的损伤程度；或用对胃粘膜有损伤作用的物质造成慢性胃溃疡模型，在一定时间内给予一定量的受试样品，观察各剂量组胃溃疡的面积和体积，反映受试样品对胃粘膜的辅助保护作用。

1.2实验动物

选用SD或Wistar健康大鼠，单一性别，180－220克，每组8－12只。

1.3实验设计及剂量分组

受试物设三个剂量组，其中一个应为人体推荐量的5倍剂量组，并同时设置正常对照组。不同的损伤模型，还应设置相应的模型对照组。慢性溃疡模型应先造模，手术次日再分组。受试样品给予时间一般为14—30天，必要时可以延长至45天。

1.4胃粘膜损伤模型

1.4.1急性胃粘膜损伤无水乙醇模型

1.4.1.1实验动物：选用Wistar或SD健康大鼠，单一性别。

1.4.1.2实验试剂及器材：无水乙醇、甲醛、解剖器械、游标卡尺、病理制片系统、显微镜等。

1.4.1.3实验方法：动物随机分空白对照组、模型组和受试样品三个剂量组。各剂量组灌胃样品30天后，全部动物严格禁食24小时（不禁水），此期间亦禁止给予受试物。除空白对照外，所有试验组动物给予无水乙醇1.0mL/只，1小时后处死动物，暴露完整胃，结扎幽门，灌注适量10%福尔马林溶液，固定20min，然后沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，展开胃粘膜，在体视解剖显微镜下或肉眼下用游标卡尺测量出血点或出血带的长度和宽度。因宽度所代表损伤的严重性远较长度大，故双倍积分。其评分标准见表1。

表1急性无水乙醇损伤大体观察评分标准

损伤程度

1分

2分

3分

4分

出血点

1个

-

-

-

出血带长度

1－5mm

6－10mm

10－15mm

15mm

出血带宽度

1－2mm

2mm

-

-

总积分=出血点分值+长度分值+（宽度分值根2）

观察指标：各实验组胃粘膜损伤程度以损伤发生率（%）、损伤积分指数和损伤抑制率（%）表示。损伤发生率（%）=某组出现出血或溃疡的大鼠数量／该组大鼠数量×100%；损伤积分指数=组损伤评分总和/组动物数量；损伤抑制率（%）=(A-B)/A根100%（A、B分别为模型组与试验组的损伤积分）。

组织病理学观察及评分：大体检查完毕，将每只动物胃粘膜损伤最严重的部位切下，固定于10%甲醛溶液，常规制片，HE染色，镜下观察。注意选择胃粘膜正横切面，包括粘膜全层的区域观察。评分方法：以充血、出血、粘膜细胞变性坏死在整个粘膜上皮层的累及程度分为5级。充血权重为1，出血权重为2，上皮细胞变性坏死权重为3，评分标准及病变总积分公式见表2。

表2急性胃粘膜损伤组织病理学检查评分标准

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病变

1分

2分

3分

4分

5分

充血

＜1/5

1/5－2/5

2/5－3/5

3/5－4/5

上皮全层

出血

＜1/5

1/5－2/5

2/5－3/5

3/5－4/5

上皮全层

上皮细胞变性坏死

＜1/5

1/5－2/5

2/5－3/5

3/5－4/5

上皮全层

病变总积分=充血积分+出血积分根2+上皮细胞变性坏死积分根3

1.4.2急性胃粘膜损伤消炎痛模型

1.4.2.1实验动物：选用Wistar或SD健康大鼠，单一性别。

1.4.2.2实验试剂及器械：消炎痛、甲醛、解剖器械、游标卡尺、病理制片系统、显微镜等。

1.4.2.3实验方法：动物随机分空白对照组、模型组和受试样品三个剂量组，灌胃给予动物受试物30天后，禁食不禁水24小时，模型组和剂量组给予消炎痛40mg/kg一次性腹腔注射。5小时后处死动物，剖腹将胃取出，结扎幽门和贲门，从十二指肠与幽门部结合处注入10%甲醛溶液5mL，固定20分钟后，沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，展开胃粘膜，用纸吸干，观察胃粘膜损伤程度。用游标卡尺测量胃出血或溃疡的最大长度及宽度，以出血或溃疡的最大长宽径作为损伤指标评分。消炎痛所致胃粘膜损伤的溃疡一般较小，肉眼观查以点状多见，其评分标准见表3。

表3急性胃粘膜损伤消炎痛模型大体观察评分标准

损伤形态

1分

2分

3分

4分

出血点

1个

-

-

-

出血带长度

1－2mm

2－4mm

4－6mm

6mm

出血带宽度

1－2mm

2mm

-

-

总积分=出血点分值+长度分值+（宽度分值根2）

注：长度和宽度均以最大径计。

观察指标：各实验组胃粘膜损伤程度以损伤发生率