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辅助改善记忆检验方法

1动物实验

1.1跳台实验

1.1.1原理

反应箱底铺有通36v电的铜栅，动物受到电击，其正常反应是跳上箱内绝缘的平台以避免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台，如此训练5min，并记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。24h或48h重作测验，此即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和3min内的错误总数。停止训练5天后（也可以在训练后的一周、两周或其它时间点）进行记忆消退实验。

1.1.2仪器与试剂

跳台仪：该装置为10×10×60cm3的被动回避条件反射箱，用黑色塑料板分隔成5间。底面铺以铜栅，间距为0.5cm，可以通电，电压强度由一变压器控制。每间左后角置一高和直径均为4.5cm的绝缘平台。

试剂：樟柳碱、东莨菪碱、环已酰亚胺、乙醇。

1.1.3实验方法

1.1.3.1实验动物推荐使用近交系小鼠。断乳鼠或成年鼠（18－22g）。用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠。雌雄均可，单一性别，每组10－15只。

1.1.3.2剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

1.1.3.3实验方法及步骤

1.1.3.3.1受试样品对正常小鼠记忆的影响

末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。将动物放入反应箱内（台上、台下）适应环境3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以36v的交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台（绝缘体），以躲避伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台上。训练一次后，将动物放在反应箱内的平台上，记录5min内各鼠跳下平台的错误次数和第一次跳下平台的潜伏期，以此作为学习成绩。24或48h后进行重测验，将小鼠放在平台上，记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、各鼠3min内电击次数和受电击的动物数总数，同时计算出现错误反应的动物的百分率（受电击的动物数占该组动物总数的百分率）。停止训练5天后（包括第5天）可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验（方法同重测验）。

1.1.3.3.2受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响

1.1.3.3.2.1造模

记忆获得障碍模型制造：训练前10min腹腔注射樟柳碱或东莨菪碱5mg/kgBW；

记忆巩固障碍模型制造：训练前10min腹腔注射环已酰亚胺120mg/kgBW；

记忆再现障碍模型制造：重测验前30min灌胃30%的乙醇10mL/kgBW。

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1.1.3.3.2.2记忆测试的操作方法：同1.1.3.3.1。

1.1.4数据处理及结果判定

潜伏期结果为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

错误次数和3min内跳下平台的动物数均为记数资料，可用2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。

若受试样品组与对照组比较，潜伏期明显延长，错误次数或跳下平台的动物数明显少于对照组，差异有显著性，以上三项指标中，任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。

1.1.5注意事项

1.1.5.1动物在24h内有其活动周期，不同时相处于不同的觉醒水平，故每次实验应选择同一时相（上午8-12点或下午1－4点）。

1.1.5.2实验应在隔音，光强度和温、湿度适宜且保持一致的行为实验室进行。

1.1.5.3推荐使用纯系动物，实验前数天将动物移至实验室以适应周围环境。

1.1.5.4实验者必须每天与动物接触，如：喂水、喂食和抚摸动物。

1.1.5.5减少非特异性干扰，如：情绪、注意、动机、觉醒、运动活动水平、应激和内分泌等因素。

1.1.5.6考虑动物种属差异。

1.2避暗法

1.2.1原理

利用小鼠嗜暗的习性设计一个装置，一半是暗室，一半是明室，中间有一小洞相连。暗室