免疫学技术和临床.pptVIP

基本分析方式01夹心法(Sandwich)02竞争结合(Competitivebinding)03试剂的加入，孵育和清洗04同步(Simultaneous)(1步,1次清洗)05分步(Sequential)(2步,2次清洗)06“Piggyback＂(2步,1次清洗)07Access的分析方式夹心法分析方式捕捉抗体(Captureantibody)和标记抗体(labeledantibody)每个不同的抗体可以针对不同的抗原决定簇，或二个在同一个抗原决定簇分析更特异因为二个抗体同时反应适合于检测大分子物质

bhCG TSH IgE ProlactinFSH LH Ferritin HBsAg竞争法分析方式T3 FT3B12DigoxinProgesteroneT4FT4FolateCortisol Estradiol只有捕捉抗体

主要针对小分子物质检测没有足够表面积的分析物去符合“夹心法＂要求如何去设计一个免疫分析试剂一个免疫分析项目的诞生里程碑(Milestones)

市场调研确定需求项目的详细特点要求确定分析方式研发和优化证明分析表现符合项目的详细特点要求(betasites,clinicalstudies)提交注册临床应用(claims)筛查（Screening）检测（Detection）诊断（Diagnosis）分层（Staging）预后（Prognosis）监测（Monitoring）项目临床应用的要求必须到达的分析表现特徵灵敏度（Sensitivity）特异性（Specificity）精密度（Precision）线性范围（Dynamicrange）其它项目的临床应用与分析表现01需考虑的因素02分析物的特徵03体积（竞争法还是夹心法）04厚度（一步法，二步法，反应时间等）05潜在的“钩状效应＂（hookeffect）-假阴性06解决的方法可以使用2步法方式07样品量和试剂量的平衡08抗干扰能力09仪器的能力／局限性10预处理的要求分析方式的选择原材料

抗体标准品封闭试剂（稀释液）清洗缓冲液01Y02Y03Y04Y05Y06试剂原材料的选择单克隆(Monoclonal)和多克隆(polyclonal)1选择的标准(criteria)2特异性(Specificity)3灵敏度(Sensitivity)4供应能力(Supply)5相关性(Correlation)6可制造性(Manufacturability)7花费(Cost)8抗体的选择多克隆抗体(PolyclonalAntibodies)免疫动物获得,如羊或兔时间长,复杂的制作流程注射,监测滴度(可能反覆注射)周期性的抽血获得特徵化(Characterization)和纯化(purification)生产出＂鸡尾酒＂式的抗体,针对所有抗原决定簇适合对临床灵敏度要求较高分析测试YYYYYYYYYYYYYYYYYYYY单克隆抗体(Monoclonalantibodies)YYYYYYYYYYYYY克隆的结果

抗体的产生具有高度的同源性和特异性并针对一个抗原决定簇可以选择最好的抗体在大量生产时可以确保持续的供应适合对临床特异性和批间一致性要求较高的分析测试BDACE筛选许多的抗原决定簇并非一种分子所独有被测抗原的游离和结合方式抗体需经过灵敏度，特异性和稳定性的评价被测抗原的稳定性不同抗体的选择案例:hLH抗原位点图BetaAlphaB-D1hTSHhCGB-D2hCGA-D1hCGhFSHhTSHB-D3A-D3A-D2hCGhFSHhTSH案例:Troponin-I抗原位点图肌钙蛋白-I稳定性的问题氧化的问题磷酸化的问题 N-terminalC-terminal0102030405060708090100110120130140150160170180190200POO____Access1stGen31-3458-70(cross-react)157-160PMPDetectAccessAccuTnI_______24-4041-49PMPDetect