大丽轮枝菌微菌核发育相关基因VdRPN2的功能分析.pdfVIP

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2025-01-10 发布于江西
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大丽轮枝菌微菌核发育相关基因VdRPN2的功能分析.pdf

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摘要Ⅰ

ABSTRACTⅢ

第一章文献综述1

1棉花黄萎病1

1.1棉花黄萎病的分布及危害1

1.2棉花黄萎病的防治措施1

2大丽轮枝菌2

2.1大丽轮枝菌的生物学特性2

2.2大丽轮枝菌的遗传学研究3

2.3大丽轮枝菌的微菌核3

2.3.1影响微菌核发育的相关因素3

2.3.2微菌核发育的相关基因4

326S蛋白酶体途径5

3.1蛋白质降解途径5

3.2泛素蛋白酶体途径降解特异蛋白质-6

3.326S蛋白酶体的结构与其亚基RPN2的功能6

4mRNA的可变剪接8

5真菌基因敲除的研究方法8

6转录组测序9

7研究目的及意义9

第二章VdRPN2基因的功能分析11

1材料与方法11

1.1供试材料11

1.1.1供试菌株和质粒11

1.1.2供试植物11

1.1.3相关试剂盒12

1.1.4相关抗生素的配制12

1.1.5相关培养基的配制12

1.1.6供试引物13

1.2方法15

1.2.1VdRPN2基因全长的获得及生物信息学分析15

1.2.2VdRPN2敲除突变体的获得16

1.2.3CTAB法提取基因组DNA18

1.2.4Southern杂交检测18

1.2.5荧光定量PCR检测20

1.2.6VdRPN2回补突变体的获得20

1.2.7突变体的表型观察22

大丽轮枝菌微菌核发育相关基因VdRPN2的功能分析

1.2.7.1微菌核的发育22

1.2.7.2菌丝穿透性22

1.2.7.3菌落形态及菌丝生长速率22

1.2.8致病力的测定22

2结果与分析23

2.1VdRPN2基因全长的获得及生物信息学分析23

2.2敲除突变体的获得24

2.2.1敲除转化子的获得24

2.2.2敲除转化子的荧光定量PCR检测28

2.2.3敲除转化子的Southern杂交检测29

2.3回补突变体的获得30

2.4突变体的表型验证31

2.4.1菌落形态及菌丝生长速率31

2.4.2微菌核发育32

2.4.3菌丝穿透力32

2.4.4致病性33

3结论与讨论34

第三章转录组测序初步解析VdRPN2的作用机制36

1材料与方法36

1.1供试菌株36

1.2转录组样品准备36

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