代谢溴虫氟苯双酰胺的二化螟细胞色素P450酶的预测.pdfVIP

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摘要I

ABSTRACTIII

第一章文献综述1

1二化螟及其抗药性概况1

1.1二化螟的分布和危害1

1.2二化螟抗药性发展2

2溴虫氟苯双酰胺及其作用机理3

3昆虫抗药性机制概述4

3.1表皮穿透率下降4

3.2解毒酶代谢抗性4

3.3靶标抗性7

4昆虫细胞色素P450酶体外功能验证7

4.1原核表达系统7

4.2真核表达系统8

5本研究的目的与意义10

第二章异源表达二化螟P450基因果蝇品系对溴虫氟苯双酰胺敏感性测定11

1材料与方法11

1.1供试昆虫11

1.2实验试剂和仪器12

1.3实验方法12

2结果与分析14

2.128个过表达二化螟P450基因果蝇品系对溴虫氟苯双酰胺2个浓度的生物测定

14

2.2daCsCYP321F3果蝇品系对溴虫氟苯双酰胺5个浓度的生物测定17

3讨论与结论18

第三章二化螟CsCYP321F3真核体外表达及IC的测定19

50

1材料与方法19

1.1实验材料、试剂与仪器19

1.2昆虫细胞的培养20

代谢溴虫氟苯双酰胺的二化螟细胞色素P450酶的预测

1.3重组杆状病毒的制备22

1.4病毒滴度的测定24

1.5重组蛋白的制备26

1.6蛋白含量的测定27

1.7P450酶含量的测定27

1.8重组P450酶对模式底物的代谢活力测定28

1.9重组P450酶代谢EC的K值的测定30

m

1.10三种药剂对重组P450酶的IC的测定30

50

2实验结果31

2.1滴度的测定31

2.2重组P450酶蛋白含量的测定32

2.3重组P450酶含量的测定32

2.4重组酶CsCYP321F3的代谢活力测定33

2.5ECK34

重组酶代谢的值测定

m

2.6P450IC35

三种药剂对重组酶50的测定

3讨论与结论36

全文总结39

参考文献41

致谢47

摘要

代谢溴虫氟苯双酰胺的二化螟细胞色素P450酶的预测

摘要

二化螟是危害水稻的重要害虫。当前抗性监测结果显示，我国多个地区的二化螟

对氯虫苯甲酰胺和氟虫双酰胺等双酰胺类化学药剂已经产生高水平抗性。溴虫氟苯双

酰胺是新上市的、与传统双酰胺类药剂作用靶标不同的新型药剂，为了预测该新型双

酰胺类药剂与氯虫苯甲酰胺产生交互抗性的可能性，我们利用实验室前期构建的过量

表达二化螟P450基因果蝇品系，通过生物测定筛选出可能对溴虫氟苯双酰胺具有代

谢作用的二化螟P450酶，并进一步通过P450酶体外表达、酶活力测定以及对不同药

剂IC50的测定，初步验证该二化螟P450对溴虫氟苯双酰胺的代谢作用。研究结果总

结如下：

1.过表达二化螟P450基因果蝇品系对溴虫氟苯双酰胺的敏感性测定

在实验室前期获得转二