《基因克隆操作过程》课件.pptVIP

*****************课程目标了解基因克隆的概念掌握基因克隆的基本原理和应用。学习基因克隆操作步骤熟悉基因克隆技术的操作流程和方法。探讨基因克隆的应用领域认识基因克隆技术在医学、农业、工业等方面的应用。关注基因克隆的伦理问题思考基因克隆技术带来的社会伦理和安全问题。什么是基因克隆复制基因基因克隆是指利用生物技术，将特定基因从生物体中分离出来，并将其复制到载体上，然后将载体导入宿主细胞，使基因在宿主细胞中大量繁殖，从而获得大量相同基因的过程。应用广泛基因克隆技术在医学、农业、工业等领域具有广泛的应用价值，例如基因诊断、药物研发、转基因生物培育等等。基因克隆的历史1970s第一个重组DNA分子诞生，标志着基因克隆时代的开始。1977年第一个基因克隆成功，科学家成功地克隆了第一个基因。1980s基因克隆技术迅速发展，应用范围不断扩展，如基因诊断、药物研发等。1990s人类基因组计划启动，标志着基因克隆技术进入新的发展阶段。21世纪基因克隆技术与其他生物技术结合，例如基因编辑技术，推动了生物技术领域的快速发展。基因克隆的原理目标基因复制利用生物技术，将目标基因从生物体中分离出来，并进行大量复制。载体构建将复制后的目标基因插入到能够在宿主细胞中复制和表达的载体中。宿主细胞转化将构建好的载体导入宿主细胞，使宿主细胞获得目标基因并进行表达。基因克隆的步骤1获取目标基因从生物体中提取所需的基因序列。2构建载体选择合适的载体，并将目标基因插入载体。3转化宿主细胞将重组载体导入宿主细胞，使宿主细胞表达目标基因。4筛选阳性克隆子筛选出含有目标基因的宿主细胞克隆。5扩增和保存克隆子培养阳性克隆子并进行大规模扩增，保存克隆子。获取目标基因1基因文库从目标生物体中提取基因组DNA，构建基因文库，为目标基因的获取提供素材。2PCR扩增使用已知目标基因序列设计引物，通过PCR技术将目标基因从基因文库中扩增出来。3基因合成根据目标基因序列，使用化学合成方法直接合成目标基因片段。构建载体1选择合适的载体根据目标基因的大小、宿主细胞类型等选择合适的载体2构建载体将目标基因插入载体，形成重组载体3验证载体通过酶切、PCR等方法验证重组载体是否构建成功将基因插入载体1限制性内切酶切割载体和基因2连接酶连接基因和载体3重组载体包含目标基因的载体转化宿主细胞1重组DNA进入宿主细胞例如细菌或酵母菌2转化方法化学转化、电穿孔3选择性培养基筛选含有重组DNA的细胞筛选阳性克隆子1培养基筛选利用特定的培养基，例如含抗生素的培养基，筛选出含有目的基因的克隆子。2PCR鉴定通过PCR技术，使用与目的基因特异性引物进行扩增，验证克隆子中是否含有目的基因。3测序验证对阳性克隆子进行测序，确认目的基因序列是否正确，并排除可能存在的错误。扩增和保存克隆子培养克隆将含有目标基因的重组载体导入宿主细胞后，需要培养这些细胞，使它们增殖，从而扩增目标基因的拷贝数。提取克隆培养一段时间后，需要提取目标基因的克隆子，并进行纯化，以确保其纯度和完整性。保存克隆纯化后的克隆子需要保存起来，以便进行后续的实验和应用。保存方法通常包括冷冻保存或冻干保存。蛋白质表达转录和翻译将克隆的基因导入宿主细胞后，宿主细胞会根据基因序列合成相应的蛋白质。蛋白质折叠合成的蛋白质需要折叠成正确的三维结构，才能发挥其生物学功能。表达水平可以通过调节基因表达水平，控制蛋白质的产量。纯化和鉴定蛋白质1鉴定蛋白质使用各种技术确定蛋白质的结构和功能2纯化蛋白质从细胞裂解液中分离出目标蛋白质3表达蛋白质使用克隆基因在宿主细胞中生产蛋白质基因克隆应用案例基因克隆技术广泛应用于医学、农业、工业等领域。它帮助我们更好地了解基因的功能，并利用基因来治疗疾病、改良作物、生产新产品。例如，通过基因克隆可以生产大量的胰岛素，用于治疗糖尿病患者。基因克隆还可以用于改良农作物，提高产量和品质。医学应用1疾病诊断基因克隆技术可以用来诊断各种遗传性疾病，如囊性纤维化、亨廷顿氏舞蹈症等。2药物研发通过克隆药物靶点基因，可以研究药物的作用机制，并开发更有效的药物。3基因治疗利用基因克隆技术可以将正常的基因导入患者体内，治疗遗传性疾病。农业应用培育高产优质作物抗病虫害品种提高牲畜产量工业应用生物燃料生产基因克隆技术可以用来改造微生物，提高生物燃料的产量，减少对化石燃料的依赖。生物降解塑料基因工程可以用来创造能够分解塑料的微生物，从而减少塑料