NAMPT介导NAD+生成对肥胖小鼠卵母细胞质量的影响.pdf

目录

摘要I

ABSTRACTIII

缩略词V

前言VII

第一部分文献综述1

第一章母源肥胖对卵母细胞质量的影响1

1.哺乳动物卵子发生1

2.卵母细胞减数分裂2

2.1减数分裂概述2

2.2纺锤体组装与染色体分离3

3.母源肥胖造成卵母细胞质量下降3

第二章NAD+的合成与代谢5

+

1.NAD功能概述5

+

2.NAD的合成途径5

+

2.1NAD的生物合成5

2.2NAMPT功能的研究进展6

+

3.NAD的代谢途径8

+

4.NAD增强策略与疾病治疗10

第二部分试验研究13

+

NAMPT-NAD通路在肥胖小鼠卵母细胞中的作用13

1.材料与方法13

1.1试验材料13

1.1.1试验动物13

1.1.2仪器设备14

1.1.3试剂耗材14

1.1.4溶液配制14

1.1.5抗体14

1.2试验方法14

1.2.1卵母细胞的获取和培养14

1.2.2体外受精及早期胚胎培养15

1.2.3ROS染色15

1.2.4免疫荧光染色16

1.2.5蛋白质免疫印迹16

1.2.6过表达实验17

1.2.7体外敲减实验21

+

1.2.8NAD水平检测21

1.3数据的分析与统计21

2.结果与分析21

+

2.1肥胖小鼠卵母细胞NAMPT表达量和NAD含量降低21

2.2NAMPT敲减影响卵母细胞的减数分裂进程和代谢功能23

2.2.1NAMPT敲减效率的检测23

2.2.2NAMPT敲减阻碍卵母细胞减数分裂成熟23

2.2.3NAMPT敲减影响卵母细胞减数分裂装置组装24

2.2.4NAMPT敲减诱导卵母细胞氧化应激25

2.3NAMPT过表达缓解肥胖小鼠卵母细胞缺陷表型26

2.3.1过表达实验的验证26

2.3.2NAMPT过表达缓解肥胖小鼠卵母细胞减数分裂异常27

2.3.3NAMPT过表达改善肥胖小鼠卵母细胞氧化应激状态28

2.4烟酸部分改善NAMPT缺陷引起的减数分裂异常和氧化应激29

2.4.1NAMPT抑制剂FK866影响卵母细胞减数分裂进程29

2.4.2烟酸能够挽救FK866处理的卵母细胞异常表型30

2.5体外添加烟酸提高肥胖小鼠卵母细胞质量和发育潜能32

2.5.1体外添加烟酸部分改善肥胖小鼠卵母细胞质量