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摘要I

ABSTRACTIII

符号及缩略语V

第一章文献综述1

1自噬概述1

2SNARE蛋白1

2.1SNARE蛋白分类2

2.2SNARE复合物组装2

2.3STX17蛋白3

3SCFD1蛋白3

4蛋白表达系统3

4.1原核表达系统4

4.2真核表达系统6

5蛋白纯化7

5.1亲和层析分离技术8

5.2其他技术9

6本文研究概述10

6.1立题依据10

6.2主要研究内容10

6.3研究技术路线图10

第二章自噬蛋白原核表达系统的构建11

1试验材料11

1.1主要试剂11

1.2主要仪器设备11

1.3试剂配制12

2试验方法13

2.1目的片段的扩增13

2.2PCR扩增产物的回收15

2.3酶切载体及酶切产物回收15

2.4无缝连接16

2.5转化大肠杆菌16

2.6菌落PCR鉴定16

2.7质粒小提17

2.8酶切验证17

3结果18

3.1目的片段的扩增18

3.2菌落PCR鉴定18

3.3酶切验证19

3.4测序结果20

4讨论20

4.1目的基因的扩增20

4.2载体双酶切21

4.3无缝连接21

5本章小结22

第三章自噬蛋白STX17和SCFD1体外直接互作探究23

1试验材料24

1.1主要试剂24

1.2主要仪器设备24

1.3试剂配制24

2试验方法25

2.1重组质粒转化BL21（DE3）感受态细胞25

2.2重组蛋白诱导表达条件优化25

2.3STX17和SCFD1重组蛋白的纯化27

2.4InvitroGSTpull-down试验27

2.5统计学分析27

3结果28

3.1STX17重组蛋白诱导表达条件优化28

3.2SCFD1重组蛋白诱导表达条件优化31

3.3自噬蛋白STX17和SCFD1体外直接互作研究34

4讨论34

4.1宿主菌株与表达载体的选择35

4.2STX17和SCFD1重组蛋白诱导表达条件优化35

4.3STX17和SCFD1重组蛋白的纯化37

4.4STX17和SCFD1蛋白体外直接互作探究37

5本章小结38

全文结论与展望39

参考文献41

致谢51

SCFD1蛋白互作研究

摘要