Vimentin蛋白影响H9N2亚型禽流感病毒复制及其调节脂质代谢的功能机制研究.pdf

资助项目

国家重点研发计划-免疫佐剂、免疫增强剂及疫苗生产关

键技术研究(2017YFD0500706）

TheNationalKeyRDProgramofChina-Researchon

keytechnologyofimmuneadjuvant,immuneenhancer

andvaccineproduction

(2017YFD0500706）

目录

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摘要I

ABSTRACTV

缩略语中英文对照IX

研究目的及意义XI

第一篇文献综述1

第一章禽流感病毒与波形蛋白的研究进展1

1H9N2亚型禽流感病毒的研究进展1

1.1H9N2亚型禽流感病毒的发现与流行1

1.2禽流感病毒的结构特性2

1.3禽流感病毒的复制周期4

1.4禽流感病毒的预防与治疗5

2波形蛋白功能研究进展6

2.1波形蛋白结构与功能6

2.2波形蛋白与病毒相互作用研究进展7

2.3基因编辑技术的发展与应用8

3脂质代谢在病毒感染细胞中的作用研究10

3.1脂质与病毒复制10

3.2脂质代谢调控通路11

参考文献13

第二篇研究内容25

第二章真核表达Vimentin蛋白抑制H9N2亚型AIV的早期复制25

1材料与方法26

1.1材料26

1.2方法27

2结果34

2.1真核表达载体FLAG-vimentin的构建34

2.2VimentinH9N2AIVHela35

蛋白对亚型在细胞中复制的影响

2.3敲低内源性Vimentin蛋白对H9N2亚型AIV增殖的影响37

2.4Vimentin基因缺失细胞系KO-vimentin的构建38

2.5WesternblotH9N2AIVHela/KO-vimentin40

检测亚型在细胞中的增殖

Vimentin蛋白影响H9N2亚型禽流感病毒复制及其调节脂质代谢的功能机制研究

3讨论40

4本章小结41

参考文献42

第三章原核表达Vimentin阻断对H9N2亚型AIV复制的影响45

1材料与方法45

1.1材料45

1.2方法46

2结果48

2.1原核表达载体pColdI-vimentin构建48

2.2原核诱导Vimentin蛋白表达及纯化49

2.3CCK8方法检测原核表达Vimentin蛋白对Hela细胞活力的影响50

2.4原核表达Vimentin蛋白对H9N2亚型AIV在Hela细胞中复制的影响51

3讨论52

4本章小结53

参考文献54

第四章脂质代谢在H9N2亚型AIV感染细胞中的作用研究57

1材料与方法58

1.1材料58

1.2方法59

2结果60

2.1H9N2亚型AIV感染影响细胞内胆固醇含量60