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玉米超氧化物歧化酶(SOD)的提取及活性测定--第1页

玉米超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活性测定

一、目的

1．通过对玉米超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活性测定，掌握硫酸铵盐析沉淀蛋白质和

超滤浓缩的方法和原理。

2．掌握测定超氧化物歧化酶（SOD）的活力和比活力的方法。

3．掌握分级盐析沉淀的方法和原理，以及透析的方法和原理。

二、原理

超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，简称SOD），它广泛存在于各类生物体内，

按其所含金属离子的不同，可分为3种：Cu,Zn-SOD，Mn-SOD，Fe-SOD。SOD催化如下

反应：

--SOD

·O·+

O++2HHO+O

22222

在生物体内，它是一种重要的自由基清除剂，能治疗人类多种病症，如炎症、脑外伤、

放射病、自身免疫性疾病和抗衰老等，对生物体有保护作用。在玉米中，SOD主要存在于

胚芽中，当将萌发的玉米籽粒打浆破碎后，以中性盐沉降其蛋白质部分，SOD就存在于沉

淀中，但其中有许多杂蛋白，因此在盐析时先用40%（NH）SO去除杂蛋白部分，再用

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90%（NH）SO饱和上清液，经过一定时间后，再将盐析液离心，取其沉淀进行透析，

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一定时间后，则其中的SOD成分即被浓缩分离。

超滤也是一种蛋白质浓缩方法，其工作原理是运用液压迫使溶质透过膜，并按溶质分

子量、形状、大小的差异，把大溶质分子阻留在膜的一侧，而小分子溶质则随溶剂透过膜

到另一侧，使大小溶质分子得到分离。利用此原理只要选择适当的超滤膜即可将玉米浆中

SOD与其它小分子杂蛋白、可溶性糖等分离，并去除水份，得到SOD浓缩液。

SOD活性的测定：采用NBT光还原法。其原理为核黄素在有氧条件下能产生超氧自由

基负离子O-，当加入NBT后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲替（黄色），既

2月

而还原成二甲替（呈兰色）。该产物在560nm下有最大吸收峰。当加入SOD时，可以使超

月

+

氧自由基与H结合生成HO+O，从而抑制了NBT光还原的进行，使兰色二甲替生成速

222月

度减慢。通过加入不同量的SOD，一定时间后测定560nm光密度的变化，求出抑制NBT

光还原的50%的酶液量作为一个酶活力单位。

三、主要实验材料、试剂和仪器

1．实验材料：玉米籽粒。

2．试剂：注意配好每一试剂时，应立即转入试剂瓶当中，不要将试剂放在容量瓶当中存放，

一定要及时将试剂瓶贴好相应的标签，标明溶液的浓度、pH值、体积、试剂名称、配制时

间、配制人。配制时一定要标清，使用时注意不要将其弄掉，这一点将给您带来无比的快

捷和方便。在未经老师允许的情况下，不要随意倒掉实验室内的任何药品或试剂。不要随

意乱动仪器的开关及旋纽等，否则损坏全额赔偿。

（1）1％次氯酸钠：用移液