体外放射分析技术.pptVIP

第六章体外放射分析技术

Invitroradioassay体外分析发展史YalowBerson定义以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。分类:体外分析技术体外放射分析体外非放射分析放射性竞争结合分析放射性非竞争结合分析放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)免疫放射分析(immunoradiometricassay,IRMA)酶免疫分析(EIA)化学发光免疫分析(CLIA)荧光免疫分析(FIA)放射免疫分析

radioimmunoassay,RIARIA的基本原理竞争抑制结合反应：放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。12分析原理*Ag+AbAg+*Ag-Ab+*AgAg-Ab+Ag条件：*Ag与Ag免疫活性相同*Ag与Ab恒量*Ag与Ag总量大于Ab有效结合位点Ag*与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争性与Ab结合，当Ag*和Ab的量保持恒定，Ag*与Ag之和大于Ab时，则Ag*-Ab复合物的形成受Ag含量的制约，二者之间存在竟争抑制的函数关系，即随着Ag浓度的增加，Ag*-Ab复合物就减少，因为Ag*对Ab的结合被Ag竞争性抑制。根据这一函数关系的标准曲线，可求出被测抗原的含量标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。1标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。2（二）剂量反应曲线：标准曲线标准曲线的绘制方法用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F；分别测量B和F的放射性；用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。标准曲线实验由两部分组成：二、RIA的基本步骤：标准曲线：用一系列浓度递增的标准品（oAg），在严格相同的条件下同*Ag竞争与Ab结合反应，以oAg的剂量为横坐标，*Ag.Ab结合率（B%）为纵坐标制得刻度曲线（Calibrationcurve）；样本测定：同等条件下，待测样本可获得一定的B%，由此可从标准曲线上求得待测物（oAg）的含量。三、质量控制(QualityControl):目的：为了获得准确可靠的测定结果室间：某一地区/全国性机构就一些分析项目质控对各实验室所得结果进行统计比较室内：实验室内部对每次分析结果的质量进行检查和控制误差：A.随机误差(RandomError)：放射性测量的统计误差不可避免，呈高斯分实验操作的实验误差布，以精密度评价试剂配制等B.系统误差(SystematicError)：通过努力可以消除由某一固定因素引起，仪器、试剂、操作程序、试验方法等主要优点：?生物制剂，稳定性受多种因素影响，需有质量控制措施（QualityControl)?灵敏度高：可达10-9―10-12g(mol)?特异性强：抗原抗体结合具有很高的特异性?应用范围广：凡能制备相应抗体的生物活性物质，只要含量不低于RIA探测极限，都可建立?操作简便：所需