大肠杆菌O157_H7快速分子检测技术的建立及应用.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTIII

英文缩写VII

第一章文献综述1

1大肠杆菌O157:H7概述1

1.1大肠杆菌O157:H7的生理生化特性1

1.2大肠杆菌O157:H7的致病性1

2大肠杆菌O157:H7的检测技术2

2.1传统检测方法2

2.2常规PCR检测法3

2.3实时荧光定量PCR法3

3PMA-qPCR活菌定量检测技术5

4实时荧光定量PCR试剂盒的研究7

5微滴式数字PCR7

6本论文研究的主要内容和目的意义9

第二章大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR检测试剂盒的组建及性能评估.11

1材料和方法11

1.1材料11

1.2方法13

2结果与分析17

2.1HRM-RT-PCR试剂盒的组装和结果判定17

2.2试剂盒的灵敏度实验17

2.3试剂盒的特异性评价18

2.4试剂盒的稳定性评价18

2.5试剂盒的抗干扰实验20

2.6人工污染实验21

2.7试剂盒的保质期实验22

2.8试剂盒标准曲线的建立22

2.9与商品化检测试剂盒比较实验23

3讨论25

4本章小结26

第三章大肠杆菌O157:H7SD-PMAxx-qPCR活菌定量检测方法的建立29

1材料和方法29

1.1材料29

1.2方法30

2结果与分析32

2.1PMAxx处理条件优化32

2.2SD-PMAxx-qPCR对与活/死细胞的选择性36

2.3PMAxx-qPCR和SD-PMAxx-qPCR标准曲线的绘制37

2.4SD-PMAxx-qPCR灵敏度评价实验38

2.5SD-PMAxx-qPCR特异性评价实验39

3讨论39

4本章小结41

第四章大肠杆菌O157:H7微滴式数字PCR快速检测技术的建立及应用43

1材料和方法43

1.1材料43

1.2方法44

2结果与分析47

2.1ddPCR体系循环数的优化47

2.2ddPCR体系退火温度的优化48

2.3ddPCR体系引物探针浓度比的优化50

2.4ddPCR体系基因组灵敏度评价50

2.5ddPCR体系菌液灵敏度评价及标准曲线制备51

2.6ddPCR体系特异性评价52

2.7人工污染实验及ddPCR体系重复性评价53

3讨论54

4本章小结55

参考文献57

全文总结67

创新点69

攻读硕士期间发表论文71

致谢73

表格索引

表2-1本研究采用的菌株12

表2-2实时荧光定量PCR体系引物序列及参数13

表2-3实时荧光定量PCR反应体系（20μL/Test）14

表2-4实时荧光定量PCR试剂盒组成（48T）17

表2-5HRM-RT-PCR试剂盒可重复性评价结果19

表2-6反复冻融对HRM-RT-PCR试剂盒的影响19

表2-7大肠杆菌O157:H7人工污染实验试剂盒检测结果21

表2-8与商品化试剂盒灵敏度比较实验结果23

表2-9商品化试剂盒特异性评价结果24

表2-10与商品化试剂盒抗干扰性能比较结果25

表3-1引物序列30