大豆疫霉质外体效应子Ps109281和Ps140300的功能研究.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTIII

第一章文献综述1

1植物免疫的研究进展1

1.1植物的天然免疫系统1

1.2植物的PTI反应2

1.3植物的ETI反应4

1.4植物免疫信号的激活5

1.5小结和展望6

2卵菌与真菌质外体效应子的毒性功能研究进展7

2.1质外体效应子水解植物细胞壁7

2.2质外体效应子抑制植物抗性相关的蛋白酶8

2.3质外体效应子协助病原菌逃避寄主的识别10

2.4质外体效应子的其他作用机制11

2.5小结与展望12

3大豆疫霉质外体效应子研究概述12

4本研究的目的与意义13

第二章质外体效应子Ps109281被植物识别触发免疫反应15

1材料与方法16

1.1供试菌株与植物16

1.2培养基的配置16

1.3载体的构建17

1.4农杆菌介导的瞬时表达21

1.5大豆疫霉原生质体转化21

1.6gDNA的提取22

1.7敲除转化子筛选23

1.8菌丝生长速率的测定23

1.9致病性的测定24

1.10SYBRGreen实时定量PCR分析（RT-qPCR）24

1.11RNA实验25

1.12毕赤酵母表达25

1.13蛋白酶活的检测28

1.14活性氧检测28

1.15蛋白诱导本氏烟抗性28

1.16Westernbolt29

1.17考马斯亮蓝染色31

1.18显著性分析31

2结果与分析31

2.1Ps109281属于GH12家族，具有木葡聚糖酶活性31

2.2Ps109281是大豆疫霉侵染过程中的致病因子32

2.3Ps109281在不同的植物中诱导免疫反应，但不能诱导细胞坏死34

2.4Ps109281的识别需要类受体蛋白RXEG1、类受体蛋白激酶BAK1和

SOBIR137

2.5N末端序列突变导致Ps109281诱导细胞坏死能力的丧失39

2.6多种非坏死性GH12蛋白被RXEG1识别触发植物免疫反应41

3讨论43

第三章大豆疫霉质外体效应子Ps140300抑制分子模式XEG1激活植物免疫的机制

研究47

1材料与方法48

1.1供试植物与菌株48

1.2过表达转化子验证和保存48

1.3离子渗透测定49

1.4其他实验方法49

2结果与分析49

2.1Ps140300抑制XEG1及其同源蛋白Ps119627和Ps138787诱导的细胞坏死

49

2.2Ps140300是大豆疫霉侵染早期上调表达的致病因子52

2.3Ps140300蛋白能够抑制XEG1诱导的细胞坏死和活性氧迸发53

2.4Ps140300不影响RXEG1