sTIM-1P34L突变增强JEV感染的探究.pdf

本研究由国家重点研发计划(2016YFD0500402)资助

ThisstudywassupportedbytheNationalKeyResearch

andDevelopmentPlanofChina(2016YFD0500402)

目录

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摘要I

ABSTRACTIII

缩略词中英文对照VII

研究目的和意义IX

第一篇文献综述1

第一章日本脑炎病毒研究进展1

1.1JEV流行病学特征1

1.2JEV的病原特征3

1.3JEV的复制周期4

1.4JEV受体研究进展5

参考文献7

第二章TIM-1蛋白研究进展13

1.1TIM家族蛋白及其结构13

1.2TIM-1对病毒感染的作用14

1.3TIM-1在免疫调节中的作用15

1.4TIM-1在肾脏疾病中的作用16

1.5TIM1在肿瘤免疫中的作用17

参考文献19

第二篇实验部分25

第三章sTIM-1基因克隆与多态性分析25

1材料与方法26

1.1实验材料26

1.2试验方法26

2结果30

2.1猪肺脏组织sTIM-1的PCR扩增与克隆30

2.2sTIM-1基因功能域及多态性分析30

2.3sTIM-1hTIM-132

与氨基酸序列差异分析

3讨论33

4本章小结34

参考文献35

i

sTIM-1P34L突变增强JEV感染的探究

第四章sTIM-1多克隆抗体的制备37

1材料与方法37

1.1实验材料37

1.2试验方法38

2结果43

2.1sTIM-1-M基因扩增43

2.2重组质粒的双酶切鉴定43

2.3sTIM-1-M重组蛋白诱导表达及鉴定44

2.4重组sTIM-1-M蛋白纯化45

2.5Westernblotting验证多克隆抗体特异性46

2.6IFA验证多克隆抗体反应性47

2.7多克隆抗体Co-IP应用48

3讨论48

4本章小结49

参考文献50

第五章sTIM-1P34L突变增强JEV感染的探究51

1材料与方法52

1.1实验材料52

1.2试验方法52

2结果56

2.1293T细胞中过表达sTIM-1显著促进JEV感染56

2.2sTIM-1的P34L突变促进JEV感染58

2.3sTIM-1与JEVE蛋白互作60

2.4sTIM-1介导JEV感染依赖与磷脂酰丝氨酸结合位点61

2.5P34L突变增加了细胞膜上sTI