第五章蛋白质组学ppt课件.pptxVIP

第五章;重点

蛋白质与蛋白质组学的概念

难点

二维凝胶电泳、酵母双杂交等技术的原理与方法

了解

蛋白质组学在医学中的应用;蛋白质组学研究背景;蛋白质组学研究背景;

蛋白质组学是后基因组学时代研究的中心，而以阐明生物体内蛋白质表达模式与功能模式为目标的蛋白质组学成为功能基因组学研究的重要内容之一。;第一节

蛋白质组及蛋白质组学基本概念;Genome=staticcomposition;蛋白质组学（proteomics）：

以蛋白质组为研究对象，分析细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，在整体水平上揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。;表达蛋白质组学（expressionproteomics)：即把细胞、组织中的蛋白，建立蛋白定量表达图谱，观察某种细胞或组织中蛋白质的整体表达,并分析不同情况下表达图谱的变化。;人类蛋白质组学研究进展;第二节

蛋白质组学研究的内容及所采用的主要技术;;一、蛋白质组学主要研究技术

（TechnologyofProteomics）;蛋白质样品制备

(samplepreparation)

蛋白质的分离

蛋白质的鉴定

生物信息学研究

;1、蛋白质的分离;

双向电泳后的凝胶经染色后蛋白呈现二维分布图：

水平方向反映出蛋白在pI上的差异，

垂直方向反映出它们在分子量上的差别。;

;所用介质为拥有CH2=CH-CO-NH-R结构的8种丙烯酰胺衍生物系列，其中R为弱酸性或弱碱性基团，它们构成了分布在pH3-9不同值的缓冲体系。

根据一定的配方计算后，将适宜的IPG试剂添加至混合物中用于凝胶聚合，在聚合中缓冲基团通过乙烯键共价聚合至聚丙烯酰胺骨架中而形成pH梯度。通过这种方式生成的IPG不会发生电渗作用，因而可以进行特别稳定的IEF分离达到真正的平衡状态。;上样;垂直板电泳装置;电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。;(3)双向电泳

第一向：等电聚焦电泳第二向：SDS

双向电泳后的凝胶经染色后蛋白呈现二维分布图：

水平方向反映出蛋白在pI上的差异，

垂直方向反映出它们在分子量上的差别。;大肠杆菌全蛋白提取液双向电泳凝胶染色后照片;;二维电泳的优点与缺陷;如何有效的对双向凝胶电泳图像分析，如何对图谱上的蛋白质点进行检测、定量、比较、分析和归类，挖掘有价值的蛋白质点的信息并对图像进行数字化处理等分析

是双向电泳分析软件所要解决的问题。;3、蛋白质的鉴定;样品分子离子化后，根据不同离子间的质量、电荷比（质荷比）差异来确定相对分子质量的技术。

通过正确测定蛋白质分子的质量而进行蛋白质分子鉴定、蛋白质分子的修饰和蛋白质分子相互作用的研究。;;“鸟枪法(shotgun)”定量蛋白质组学技术;4、蛋白质－核酸间相互作用的研究;DnaseI可以切割DNA中磷酸二酯键，而结合蛋白质的DNA免于DnaseI水解，不能被切割。;5、蛋白质与蛋白质相互作用;GAL4转录因子的分子机理;;细胞或组织样品——蛋白样品制备——二维凝胶电泳（2D－PAGE）分离蛋白质——计算机辅助分析2D－PAGE图象——对感兴趣的蛋白质进行酶解——质谱分析——数据库检索——蛋白质鉴定——分析蛋白质在细胞与组织中的表达情况。

;第三节

蛋白质组学在医学中的应用;1、在临床肿瘤研究方面的应用

癌细胞不仅有许多特异蛋白质产物,而且这些产物还会影响其他蛋白质的翻译后加工及许多蛋白质的表达水平，因此寻找有价值的肿瘤标志物意义重大。

2、在检验医学中的应用

血清血浆蛋白质组研究、尿液蛋白质组研究以及其他体液蛋白质组研究，筛选疾病标志物。

3、传染病

4、神经性疾病

5、糖尿病、肥胖症;谢谢大家！！！