大豆对SMV强毒株系SC9抗病基因的精细定位和候选基因的功能验证.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTV

缩略词表及中英文对照IX

第一章文献综述1

1大豆花叶病毒(SMV)概述1

1.1大豆感染大豆花叶病毒后的症状和危害1

1.2大豆花叶病毒的株系划分及地区分布2

1.3大豆花叶病毒的基因组研究3

1.4大豆花叶病毒病的防治措施4

2大豆对大豆花叶病毒的抗性遗传及分子标记定位5

2.1成株抗性遗传研究5

2.2种粒抗性遗传研究5

2.3生理生化抗性研究6

2.4大豆对SMV抗性基因的等位性研究6

2.5大豆对SMV抗性基因的分子标记定位6

2.6大豆对SMV抗性基因的克隆和抗病机制的研究9

3病毒诱导的内源基因沉默(VIGS)概述10

3.1VIGS技术的作用原理及优缺点10

3.2VIGS载体11

3.3VIGS在植物基因功能研究中的应用11

4本研究的技术路线、目的和意义12

4.1技术路线12

4.2目的和意义13

第二章基于分离群体分组分析法(BSA)对SMV株系SC9抗病基因的精细定位15

1引言15

2材料和方法15

2.1试验材料15

2.2病毒接种15

2.3抗性鉴定16

2.4抗性遗传分析16

2.5基因组DNA提取和抗感池构建16

2.6引物合成、PCR扩增产物的电泳检测17

2.7遗传连锁图谱的构建及基因定位18

3结果与分析18

3.1RIL群体和F2群体抗SC9的表型鉴定18

3.2抗性遗传分析19

3.3抗病基因的精细定位19

4讨论23

第三章Rsc9位点的候选基因筛选、克隆及表达分析25

1引言25

2材料和方法25

2.1试验材料25

2.2基因参考序列获取及引物设计26

2.3对候选基因在抗感品种间诱导表达分析26

2.4Rsc9目标候选基因筛选26

2.5Rsc9候选基因的克隆及序列分析27

2.6蛋白序列分析及进化树分析27

2.7Rsc9候选基因的组织特异性表达分析27

2.8Rsc9候选基因的亚细胞定位27

3结果与分析27

3.1基因的功能预测及表达分析27

3.2候选基因的克隆及序列分析29

3.3进化树构建以及蛋白质二级结构、三级结构预测30

3.4目标候选基因的组织特异性表达分析31

3.5目标候选基因的亚细胞定位32

4讨论33

第四章Rsc9候选基因的VIGS功能验证35

1引言35

2材料和方法35

2.1试验材料35

2.2VIGS载体构建36

2.3Rsc9候选基因沉默效率的检测38

2.4抗感品种间SMV积累量的检测38

3结果与分析39

3.1沉默重组载体构建39

3.2沉默材料的获取39

3.3沉默效率检测42

3.4沉默大豆植株表型