稻瘟病菌MoSec24-2泛素化介导的COPⅡ囊泡解聚控制效应子分泌及内质网自噬的机制研究.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTIII

第一章文献综述1

1稻瘟病菌与水稻互作研究进展1

1.1稻瘟病菌侵染循环1

1.2稻瘟病菌效应分子及分泌途径2

2囊泡运输在外泌蛋白分泌过程中的作用机制研究3

2.1囊泡的分类及功能4

2.2COPII囊泡形成与转运过程4

3细胞自噬研究进展6

3.1细胞自噬的过程6

3.2内质网压力诱导的内质网自噬7

3.3COPII内膜组分蛋白Sec24参与细胞自噬8

4蛋白质泛素化参与调控膜蛋白的转运和胞内降解途径9

4.1蛋白质的泛素化过程9

4.2泛素及泛素结合蛋白调节膜蛋白转运10

4.3蛋白质泛素化参与调控胞内降解途径10

3研究目的及意义11

第二章稻瘟病菌MoSec24-2泛素化调控COPII囊泡解聚13

1材料与方法14

1.1供试菌株保存及培养条件14

1.2MoSwa2结构分析14

1.3蛋白质泛素化检测14

1.4MoSec24-2泛素化位点的鉴定16

1.5酵母转化16

1.6稻瘟病菌原生质体转化16

1.7水稻喷雾、叶鞘侵染及DAB染色16

1.8菌丝荧光定位观察17

2结果分析17

2.1MoSwa2调控MoSec24-2的泛素化17

2.2MoSec24-2的泛素化是囊泡解聚必需的19

2.3MoSec24-2的泛素化调控稻瘟病菌致病力20

2.4MoSec24-2的泛素化促进侵染菌丝扩展22

2.5MoSec24-2的泛素化参与寄主活性氧(ROS)的清除23

3讨论与结论24

第三章MoSec24-2泛素化调控内质网自噬25

1材料与方法26

1.1试验材料及培养条件26

1.2MoATG13的敲除26

1.3自噬诱导及内质网自噬水平检测27

1.4MoSec24-2互作蛋白的筛选27

2结果与分析29

2.1MoSec24-2的泛素化调控内质网自噬29

2.2MoSec24-2与自噬相关蛋白MoAtg5和MoAtg13互作30

2.3MoAtg5和MoAtg13调控内质网自噬33

2.4MoAtg13调控效应子分泌34

3讨论与结论35

全文总结及创新点37

参考文献39

附录一试验常用培养基47

附录二实验所用引物51

致谢53

攻读硕士学位期间发表的研究论文55

稻瘟病菌MoSec24-2泛素化介导的COPII囊泡解聚控制

效应子分泌及内质网自噬的机制研究

摘要

在稻瘟病菌与水稻互作过程中，稻瘟病菌会分泌大量的效应分子进入水稻细胞，

抑制寄主的免疫，促进病菌的侵染。围绕效应分子抑制寄主免疫的机制学者们已做了

深入研究，然而效应分子的胞内转运机制尚不清楚。同时，在侵染早期，大量合成的

效应分子若不能通过囊泡运输的方式及时转运出内质网而聚集，会导致内质网压力的

产生，从而启动内质网自噬。然而，内质网自噬的机制仍不清楚。本实验室前期研究

发现，稻瘟病菌囊泡解聚因子MoSwa2通过与COPII囊泡组分蛋白MoSec