miR165及靶基因CmREV与CmHB15-2功能鉴定.pdf

目录

摘要I

ABSTRACTIII

缩略词表VII

引言IX

第一章文献综述1

1植物分枝调控研究进展1

1.1腋生分生组织起始1

1.2腋生分生组织的生长2

1.3环境因素的影响2

2开花研究进展3

2.1成花路径3

2.2MicroRNA调控开花研究进展4

3miR165研究进展5

3.1miR165的结构特征及生物合成5

3.2miR165的生物学功能6

3.2.1调控植物生长发育6

3.2.2参与植物的非生物胁迫调控6

4HD-ZIPIII家族成员REV、HB15基因研究进展7

5本研究的目的意义8

第二章菊花miR165靶基因CmREV、CmHB15-2鉴定及其克隆与表达特性分析...11

1材料和方法11

1.1植物材料与菌株11

1.2试剂与仪器12

1.35RLM-RACE验证菊花miR165对其靶基因的剪切13

1.3.1RNA处理与5RACE接头连接13

1.3.2RNA反转录13

1.3.35RLM-RACE的巢式PCR13

1.4菊花miR165靶基因CmREV、CmHB15-2的克隆15

1.4.1总RNA的提取与cDNA的检测13

1.4.2CmREV、CmHB15-2基因的高保真PCR扩增13

1.4.3纯化产物连接T载并转化、测序13

1.5基因序列及系统进化树分析16

1.6组织特异性表达分析17

1.6.1菊花‘神马’不同组织的采集及总RNA提取13

1.6.2实时荧光定量实验（qRT-PCR）13

1.7亚细胞定位分析17

1.7.1载体构建13

1.7.2亚细胞定位13

1.8转录激活活性分析18

2结果与分析19

2.1菊花miR165对靶基因CmREV、CmHB15-2的剪切19

2.2CmREV基因的克隆20

2.3CmREV基因序列及系统进化树分析20

2.4CmREV组织特异性表达分析22

2.5CmREV亚细胞定位与转录激活活性分析23

2.5.1CmREV亚细胞定位23

2.5.2CmREV转录激活活性分析23

2.6CmHB15-2基因的克隆24

2.7CmHB15-2基因序列及系统进化树分析24

2.8CmHB15-2组织特异性表达分析26

2.9CmHB15-2亚细胞定位与转录激活活性分析27

2.9.1CmHB15-2亚细胞定位27