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目录
目录i
表目录v
图目录vii
摘要I
ABSTRACTIII
中英文缩略语索引VII
第一章文献综述1
1.1链霉菌沉默生物合成基因簇的激活策略1
1.1.1单菌多次级代谢产物1
1.1.2转录因子调控2
1.1.3启动子工程3
1.1.4核糖体工程4
1.1.5异源表达4
1.2PPTase过表达激活沉默生物合成基因簇7
1.2.1PPTase的概念7
1.2.2PPTase的分类8
1.2.3PPTase过表达激活沉默基因簇9
1.3选题依据10
第二章土壤链霉菌的分离、筛选和鉴定13
2.1材料与设备13
2.1.1材料与试剂13
2.1.2仪器与设备15
2.2试验方法16
2.2.1土壤链霉菌的分离纯化及保藏16
2.2.2基于NRPS功能基因的初筛17
2.2.3基于链霉菌发酵产物抑菌活性的复筛19
2.2.4分子生物学鉴定20
2.3结果与分析22
2.3.1链霉菌的分离22
2.3.2NRPS功能基因的筛选及系统发育学分析24
2.3.3NRPS链霉菌抑菌活性测定28
2.3.4分子生物学鉴定30
2.4讨论41
2.5本章小结44
第三章PPTase过表达链霉菌的构建45
3.1材料与设备45
3.1.1材料与试剂45
3.1.2仪器与设备47
3.2试验方法47
3.2.1链霉菌孢子悬浮液的准备47
3.2.2供体菌准备47
3.2.3受体菌准备48
3.2.4属间接合转移48
3.2.5结合子抗性筛选48
3.2.6结合子PCR验证49
3.2.7发酵液粗提物抗菌活性比较50
3.3结果与分析50
3.3.1抗性筛选及传代验证50
3.3.2PCR验证51
3.3.3野生型与结合子抑菌活性比较51
3.4讨论52
3.5本章小结56
第四章PPTase过表达及野生型菌株代谢谱分析57
4.1材料与设备57
4.1.1材料与试剂57
4.1.2仪器与设备57
4.2试验方法58
4.2.1HPLC指纹图谱分析58
4.2.2MALDI-TOF-MS分析58
4.3结果与分析58
4.3.1HPLC指纹图谱分析58
4.3.2MALDITOF-MS分析61
4.4讨论64
4.5本章小结65
展望67
全文总结69
参考文献71
致谢83
表目录
表1-1用于激活沉默的生物合成基因簇的方法6
表
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