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标准菌株管理规范

1范围

本文件规定了标准菌株管理的基本要求、工作流程、采购要求、验收与保存要求、制备流程、销毁要求。

本文件适用于生态环境检测领域微生物检测用标准菌株的管理，其他检测领域可参照使用。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27405实验室质量控制规范食品微生物检测

3术语和定义

GB/T27405界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1

标准菌株

至少定义到属或种水平的菌株。按其特性进行分类和描述，有明确的来源。

[来源：GB/T27405-2008，3.10]

注：直接购买的定量化商业派生菌株不作为本文件规定的标准菌株。

3.2

标准储备菌株

标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。

[来源：GB/T27405-2008，3.11]

3.3

储备菌株

从标准储备菌株转接一代后获得的同种菌株。

3.4

工作菌株

由标准菌株、标准储备菌株、储备菌株、Ⅳ代以内的工作菌株转接一代获得，可直接用于培养基检验、人员比对、阴性及阳性对照等实验活动的菌株。

3.5

代

将微生物接种至一新鲜培养基上或其中，每萌发一次即成为一代。

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4基本要求

4.1人员

4.1.1检测机构应具有相应数量的管理、技术人员，能够确保标准菌株管理工作顺利进行。

4.1.2管理人员应具备一定菌株工作管理经验，熟悉整个菌株管理的各项制度与流程，并有较好的管理、协调能力，负责日常监督和管理。

4.1.3技术人员应具备必要的专业知识、技术能力，定期接受技能培训。

4.1.4技术人员应健康状况良好，选用检测人员时,应考虑有颜色视觉障碍的人员不能执行某些涉及到辨色的实验。

4.2环境要求

4.2.1检测机构按照检测活动内容配置符合相应生物安全等级要求的实验室，应符合GB19489的规定。

4.2.2检测机构根据标准菌株的性质配备相应的设备设施，如培养箱、水浴锅、冰箱、生物安全柜、天平、干燥箱、高压灭菌器等，部分设备应考虑到用途、控温范围、控温精度和数量等要求。

4.3安全防护

4.3.1检测机构应按照检测活动内容配置符合要求的个人防护用品。

4.3.2菌株实行双人双锁负责制管理，出入库应有记录并存档。

4.4记录

菌株的保存和使用记录应妥善保存，记录内容包括（但不限于）以下内容：

a)证书文件记录。保留每一种标准菌株说明或证书文件；

b)领用记录。记录菌株名称、领用日期、领用人、保管人、用途等；

c)制备记录。记录菌株制备时间、环境条件、制备过程、制备人员等；

d)保存记录。记录保存方法、保存数量、保存培养基、保存温度、保存时间、批号等；e)核查记录。记录核查时间、核查内容、核查方法、核查结果等；

f)销毁记录。记录销毁时间、销毁原因、销毁方式、销毁人员等。

5工作流程

检测机构标准菌株管理工作流程见附录A。

6采购

6.1检测机构（人员）提出采购需求，并完成采购相关记录文件资料。

6.2应从官方菌种保藏机构或认可的具有资质的商业机构获得可溯源的标准菌株。

7验收与保存

7.1验收

检测机构收到标准菌株，应进行验收，并填写验收记录，验收内容包括（但不限于）以下内容：——标准菌株种类与采购需求的一致性；

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——外观、包装的完整性；

——标识的清晰度；

——标准菌株的有效期；

——说明书、合格证明及相关文件。

7.2保存

不同标准菌株应根据说明书要求进行保存，可选择使用冷冻干燥保存、利用多孔磁珠在-70℃保存、液氮贮存、超低温冷冻（低于-30℃)或其他有效的保存方法。保存过程中应定期核查菌株的性能。

8制备

8.1复苏

拆开标准菌株的原包装，按说明书的要求，将标准菌株转种于适当的培养基内，于适当温度下培养适当时间，进行复苏。经过复苏的菌株为第Ⅰ代菌株。

8.2平板分离

应按照制造商提供的使用说明，采用合适的非选择性平板对复苏的标准菌株进行分离，于适当温度下培养适当时间。在平板上分离的菌株为第Ⅱ代菌株。

8.3确认

应对平板分离出的菌落进行确认。确认的内容包括纯度、细胞形态等，必要时进行生化鉴定。记录确认的结果并予以保存。如发现菌株有污染、退化、变异，应及时灭菌销毁。

8.4工作菌株制备

8.4.1取一支保存的标准菌株，在复苏、分离确认合格后，可挑取纯菌落转接斜面，于适当温度下培养适当时间，制成工作菌株（第Ⅲ代菌株）；