《基因工程实验流程》课件.pptVIP

*******************基因工程实验流程基因工程技术是指利用重组DNA技术对生物体的遗传物质进行改造，从而改变生物的性状，培育出符合人类需要的生物类型。基因工程技术的应用领域非常广泛，包括医学、农业、工业等各个方面。引言基因工程是现代生物技术的重要组成部分，它通过对基因进行改造和重组，创造出具有新功能的生物体或生物产品。基因工程技术在医药、农业、环境保护等领域有着广泛的应用，为人类社会发展带来了巨大的进步。基因工程实验的目的改进生物性状通过基因修饰，提高生物的产量、品质、抗病性等。创造新生物利用基因工程技术，创造具有特定功能的新生物，例如转基因植物、抗生素生产菌等。疾病诊断和治疗基因工程技术应用于疾病诊断，如基因芯片、基因检测，以及基因治疗，如治疗遗传性疾病。基因工程的基本原理酶切利用限制性内切酶对目的基因和载体进行切割，产生相同的粘性末端。连接利用DNA连接酶将目的基因与载体连接，形成重组DNA分子。转化将重组DNA分子导入受体细胞，使目的基因整合到受体细胞的基因组中。基因工程实验的主要步骤1基因克隆将目标基因从供体生物中分离出来，并将其插入到载体中。2载体构建将目标基因与载体DNA连接，形成重组DNA分子。3转化宿主细胞将重组DNA分子导入宿主细胞，例如细菌或酵母菌。4筛选与鉴定选择含有目标基因的宿主细胞，并进行进一步鉴定。5基因表达使目标基因在宿主细胞中表达，并产生所需的蛋白质或其他产物。样品收集和处理选择样品根据实验目的和研究对象选择合适的样品。样品采集使用适当的工具和方法采集样品，避免污染和降解。样品处理对样品进行初步处理，例如清洗、破碎、匀浆等，以去除杂质和准备后续实验。样品保存将处理后的样品保存在合适的条件下，例如低温冷藏或冷冻，以确保样品的稳定性和完整性。DNA提取1细胞裂解破坏细胞膜，释放DNA2蛋白质去除分离DNA和蛋白质3DNA沉淀收集纯化的DNADNA纯化1去除杂质去除蛋白质、脂类等杂质，确保DNA的纯度。2浓缩DNA将DNA浓缩到合适的浓度，便于后续实验操作。3保存DNA将纯化的DNA保存起来，用于后续的基因工程实验。切割DNA限制性内切酶限制性内切酶是一种特殊的酶，可以识别并切割特定的DNA序列。切割位点限制性内切酶会在特定序列的特定位置切割DNA分子。产生粘性末端切割后，DNA片段会形成互补的粘性末端，便于连接。连接DNA片段1连接酶连接酶将目标基因和载体DNA连接在一起2粘性末端限制性内切酶切割产生的粘性末端能互相配对3平末端平末端连接需要特殊的连接酶转化受体细胞1选择合适的受体细胞根据基因工程的目的选择合适的受体细胞，例如细菌、酵母菌、植物细胞、动物细胞等。2制备感受态细胞将受体细胞处理成可以高效摄取外源DNA的感受态细胞。3转化受体细胞将重组DNA分子导入感受态细胞中，使其获得新的基因。转基因细胞的筛选1抗生素筛选转基因细胞通常携带抗生素抗性基因，可通过添加抗生素培养基筛选出转基因细胞。2标记基因筛选转基因细胞可能包含荧光蛋白或其他标记基因，通过荧光显微镜或其他检测方法筛选。3PCR验证通过PCR扩增目标基因，确认转基因细胞是否整合了外源基因。PCR扩增1目的扩增目标基因片段2原理利用DNA聚合酶的催化作用，以特定引物为模板，在体外进行DNA的复制3步骤模板DNA变性、引物退火、DNA延伸电泳分离1目的根据DNA片段的大小进行分离，并观察不同大小DNA片段的分布情况。2步骤将DNA样品加入到琼脂糖凝胶中在电场的作用下，DNA片段会向正极移动不同大小的DNA片段迁移速度不同根据DNA片段的位置，可以判断其大小3结果可以通过观察凝胶上的DNA条带，分析基因工程实验的结果。测序分析确定基因序列通过测序仪读取DNA序列，确定基因的精确序列信息。比对分析将测序结果与已知的基因数据库进行比对，确定基因的功能和性质。突变分析分析基因序列是否存在突变，以及突变对基因功能的影响。基因表达分析1RNA提取2反转录3qPCR4芯片分析5RNA测序蛋白质纯化细胞裂解首先，需要将含有目的蛋白的细胞进行裂解，释放出蛋白质。蛋白质分离通过不同的方法，例如离心、层析等，将目的蛋白与其他蛋白质分离。纯化步骤重复多个纯化步骤，以提高目的蛋白的纯度。蛋白鉴定最后，需要进行蛋白质鉴定，以确认纯化得到的蛋白就是目的蛋白。蛋白质检测1SDS分离不同蛋白质的常见技术，基于蛋白质的分子量