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实验一、酵母细胞发酵实验

一、摘要

运用酵母、藻类和高等真菌等微生物进行工业化大规模培养得到其干细胞，

并作为人类食品或动物饲料是工业生产中比较常用的方法。本实验课程以实验室小

型发酵罐为发酵环境，以酵母菌为发酵对象，发酵生产饲料酵母。并且在发酵罐内

没有染菌的情况下得到了115g的产品。

二、实验目的

1.学会一般培养基的制备原理、方法。

2.学会发酵过程中发酵液总糖含量及氨基氮等理化指标的常规检测方法。

3.掌握培养基及器皿的灭菌方法。

4.掌握酵母发酵工艺流程及具体操作方法。

三、实验内容

(一).斜面孢子的制备

于超净工作台面上，在火焰的保护下，用无菌接种棒挑取酵母菌少许于斜面

培养基内，先划中线，后从下而上往两边划线均匀的铺开，塞好棉塞。扎好后，置

于25~30℃恒温箱中培养（斜面朝下放），培养4~6天。

(二)摇瓶种子的制备

用接种棒刮下少量酵母菌，接种于摇瓶培养基内，置于摇床上，28℃、

240r/min恒温培养24h。

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(三)罐上各传感器的标定及发酵罐灭菌

1.罐内温度传感器的标定

100℃：取刚煮沸的水，将酒精温度计和传感器一同放入，静置一会儿，将罐

温标定为温度计所示温度；

0℃：取适量冰水混合物，将酒精温度计和传感器一同放入，待温度计示数稳

定后，将罐温标定为温度计所示温度。

2.水箱温度传感器的标定

步骤同1）。

3.DO电极“0”的标定

系统接通电源后，预热5min以上。取适量无水亚硫酸钠放入三角瓶内，并放

入200mL左右的自来水，摇动几下，保证为饱和溶液状态。将DO电极放入烧瓶

内，稍后可见DO值下降，待5~10min后，将其值设为0。将电极取出，置于一

旁。

4.在7L发酵罐中装入配好的发酵培养基（配料体积4L、消后体积4L）,先在

夹套中通入蒸汽，将罐内温度预热至100℃，再通入饱和蒸汽对发酵罐进行实罐消

毒，121℃、30min（罐压在0.12MPa左右），冷却后，通过滤空汽，并加以搅拌

（100rpm），待DO值稳定后，即可标定100%的DO值。

5.将并瓶后的摇瓶种子在火焰的保护下接入发酵罐（接种量250mL），在控

制条件（罐压：0.03~0.05MPa、罐温：28℃、DO值：50%以上、搅拌速率：100rpm

以上，视发酵罐情况而定）下进行发酵。

6.每隔0.5h记录一次罐压、罐温、DO值、搅拌速率。

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7.每隔6h取一次样（约20mL），留适量发酵液测pH值和镜检（美兰染色）

用。其余过滤后取适量滤液测总糖含量、氨基氮含量。

总糖测定步骤

实验：

实验组：

①取1mL滤液于150mL三角瓶中

②加入10mL3mol/L的盐酸液

③电炉加热至沸腾后保持3min（用晓烧杯盖住瓶口）

④冷却后加入3mol/LNaOH溶液中和

⑤准确加入20mL混合铜试剂，电炉加热沸腾后保持3min

⑥取出冷却后加2mol/L硫酸15mL

⑦立即以0.1mol/LNa2S2O3标准液滴定溶液至淡黄色