2025年基因遗传不稳定与甲基化及蛋白表达....pdfVIP

去留无意，闲看庭前花开花落；宠辱不惊，漫随天外云卷云舒。——《幽窗小记》

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不飞则已，一飞冲天；不鸣则已，一鸣惊人。——《韩非子》

天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》

长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。——李白

ｈｕｍａｎ

去留无意，闲看庭前花开花落；宠辱不惊，漫随天外云卷云舒。——《幽窗小记》

Ｓｏｄｉｕｍ

穷则独善其身，达则兼善天下。——《孟子》

海纳百川，有容乃大；壁立千仞，无欲则刚。——林则徐

百川东到海，何时复西归?少壮不努力，老大徒伤悲。——汉乐府

非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮

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先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

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士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎?死而后已，不亦远乎?——《论语》

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其身正，不令而行；其身不正，虽令不从。——《论语》

穷则独善其身，达则兼善天下。——《孟子》

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子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

好学近乎知，力行近乎仁，知耻近乎勇。——《中庸》

百学须先立志。——朱熹

子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

饭疏食，饮水，曲肱而枕之，乐亦在其中矣。不义而富且贵，于我如浮云。——《论语》

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志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟

丹青不知老将至，贫贱于我如浮云。——杜甫

学而不知道，与不学同；知而不能行，与不知同。——黄睎

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老当益壮，宁移白首之心；穷且益坚，不坠青云之志。——唐·王勃

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志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟

杭州师范大学硕士学位论文胃癌ＫＬＦ６、ＣＤＸ２基因遗传不稳定与甲基化及蛋白表达的关系

反应参数为：

９５℃９ｍｉｎ，９４℃３０ｓ，５５／５０℃４５ｓ，７２℃７５ｓ，７２℃１０ｍｉｎ，４℃００

４０ｃｙｃｌｅｓ

扩增产物经８％聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色，证实ＰＣＲ扩增成功。用

ＳｓｓＩ甲基化酶处理的基因组ＤＮＡ作为阳性对照，双蒸水处理的作为阴性对照。

３细胞培养

１．１

细胞贴壁生长于ＲＰＭｌｌ６４０培养液中，内含ＩＯＯｍＬ／Ｌ胎牛血清、１×１０５／Ｌ青

Ｃ０２的饱和湿度箱中培养，每２～３ｄ

霉素、ｌＯＯｍｇ／Ｌ链霉素置于３７。Ｃ、５０ｍＬ／Ｌ

消化传代１次。传代时，常规消化ＳＧＣ一７９０１细胞，置于７５ｍｍ培养瓶中，培养

２４ｈ后分别用含５×ｉ０３ｎｍ５ｏ’－ｌ／ＬＡｚａ－ＣｄＲ的完全培养液连续培养２４ｈ、７２ｈ和９６ｈ

后弃去药液后进行实验。

１．１４ＷｅｓｔｅｒＢｎＩｏｔ

（１）分别收集５＇－Ａｚａ—ＣｄＲ（５×ｉ０３ｎｍｏｌ／Ｌ）处理２４ｈ、７２ｈ、９６ｈ后的Ｓ

细胞，ＰＢＳ洗涤一次，５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ弃上清，加入细胞裂解液裂解细胞。