第一章制片方法及准备工作ppt课件.pptxVIP

植物显微技术

计划学时：48讲课16实验32

主要参考书：

1.王灶安主编《植物显微技术》

2.曾小鲁主编《实用生物学制片技术》

3.郑国錩主编《生物显微技术》

4.黄承芬，杜桂森编著《生物显微制片技术》

5.郑若玄编著《实用细胞学技术》

6.李和平主编《植物显微技术》;内容简介

植物制片的方法及准备工作

石蜡法制作原理与方法

其他制片方法

植物显微化学制片

半薄切片和超薄切片

显微镜的主要光学部件及性能

各类显微镜简介

几种显微技术的应用

显微摄影技术;研究论文题目：

几种常绿植物（海桐、洋玉兰、冬青卫矛、桂花、黄杨等）叶片解剖结构研究

几种药用植物（地黄、黄精、丹参、乌头、麦冬等）肉质根解剖结构特征

及其增粗生长机理研究

变态器官萝卜、胡萝卜、生姜、莲藕等解剖结构研究

松属植物（雪松、白皮松、油松、华山松等）表皮特征及叶片解剖结构研究

蔷薇科李属植物（日本樱花、晚樱、红叶李、碧桃）腺体结构特征研究;第一章植物制片的方法及准备工作

植物制片的方法

切片法用切片刀或刀片将各种组织切成薄片制成玻片标本的方法。

1.徒手切片法

2.石蜡切片法（切片厚度8-10μm）

3.火棉胶切片法

4.冰冻切片法

5.滑走切片法

6.半薄切片法（切片厚度1-2μm）

7.超薄切片法（切片厚度50-60nm）;非切片法将小形植物体或较大植物体的一部分或其组织，不用刀切成薄片而制成玻片标本的方法。

1.整体装片法

2.涂片法

3.压片法

4.平铺法

5.离析法

6.扫描电镜样品制备;制片前的准备工作

制片用的主要设备

1、显微镜;2、滑走切片机;2、滑走切片机;4、冰冻切片机;5、超薄切片机;6、切片刀及其附件;7、自动磨刀机;8、染色工具

染色缸;卧式染色缸;染色皿;9、载玻片和盖玻片

载玻片的规格

76×26mm，厚度：1～1.2mm。

盖玻片的规格

方形：18×18mm，20×20mm，22×22mm，24×24mm。

长盖玻片:50×24mm或60×24mm。

厚度：0.13～0.17mm。

;盖玻片规格;小型真空泵;11、电热温台

;

;低浓度溶液的配制

1%番红水溶液的配制：1g番红溶于100ml蒸馏水中。

0.1%固绿酒精溶液的配制：0.1g固绿溶于100ml95%的酒精溶液中。;第二章石蜡法制片原理与方法

材料的选择、采集与分割

取样前应注意的问题

1.研究正常结构时，应选择健全而具有代表性的部位取材；采取病理材料时，除取其病变的部位外，还应从病变的中央部分向四周，连同正常组织一起采取，以利观察分析。

2.采取标本前，要根据制片的要求，选择并配制固定液，取材后应立即投入固定液，以防组织自溶和腐败。;3.切取材料时，刀必须锐利，动作要快但要仔细，切割时切勿拉锯式的来回切取，镊取时须轻夹轻放，尽量不损伤材料。

4.材料尽可能新鲜，并切成所需的大小。这样有利于固定液的透入。

5．取材时要详细记录日期、采集地点、标本名称、时期、取材部位、断面和固定液等。;样品采集与分割

1、叶;玉米叶;2、根;根尖分区;;3、茎;4、花;花药的发育;;单核胚囊;第一次有丝分裂;二核胚囊;第二次有丝分裂;四核胚囊;八核胚囊;植物材料的分割;材料的固定

固定的目的和作用

1.防止组织自溶和腐败

2.使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存下来，从而保存细胞的各种组成成分、形态和结构。

3.使细胞内不同的成分产生不同的折光率．造成光学上的差异，使原来在生活情况下看不清楚的结构变得清晰易见。

4.有的固定剂有助染作用(如醋酸、苦味酸)，从而使细胞各部分易于染色；

5.固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，有利于操作。;固定液的选择

选择固定液时，必须符合下列条件：

1.能迅速杀死细胞，使细胞内的成分凝固或沉淀，从而使细胞的形态、结构和成分不发生变化。

2.必须具有快的渗透速度，使组织内、外迅速固定。

3.对组织细胞尽可能不发生收缩或膨胀现象，以及不产生人为的产物。

4.能增加细胞内各结构的折光率，易于鉴别。

5.能使组织变硬，适于切片，但又不致使材料变得太硬而松脆。

6.是良好的保存剂，便于材料的保存。;固定时的注意事项

1.固定的材料越新鲜越好。

2.材料与固定液的比例以1：20为准。

3.根据材料的性质和制片的目的选择固定液，固定液