考向09 基因工程江苏高考生物之【考前押大题】【含答案解析】.docx

考向09基因工程

1．（2023·江苏扬州·扬州中学校联考模拟预测）土壤盐渍化影响水稻生长发育，将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图，其中bar为抗除草剂基因，Tetr为四环素抗性基因，Ampr为氨苄青霉素抗性基因，①~⑦表示操作过程。

限制酶

BamHⅠ

BclⅠ

SmaⅠ

Sau3AⅠ

识别位点及切割位点

-G↓GATCC-

-T↓GATCA-

-CCC↓GGG-

-↓GATC-

(1)OsMYB56基因游离的磷酸基团侧为__________（“5”或“3”）端，过程①PCR扩增OsMYB56基因时加入的酶催化__________键的形成，还需要添加引物，应选用引物组合__________。

①5-CTTGGATGAT-3????????②5-TAAGTTGTCT-3????????③5-TAGTAGGTTC-3

④5-TCTGTTGAAT-3????????⑤5-ATTCAACAGA-3????????⑥5-ATCATCCAAG-3

(2)根据基因表达载体的结构组成分析，Ti质粒中的CaMV35S是___________，其功能是___________。基因表达载体中，OsMYB56基因和bar基因编码链的方向___________（填“相同”或“相反”）。

(3)过程③应选用限制酶__________切割质粒，利用所选限制酶进行操作的优势是__________，切割后需要用___________进行连接才能获得重组质粒。

(4)为了筛选出含重组质粒的受体细胞，④过程应在添加___________的选择培养基上培养。培养后获得的菌落不能判定是否含有重组质粒，原因是___________。

【答案】(1)5磷酸二酯（键）①④(2)启动子RNA聚合酶识别和结合的部位，（启动转录过程）相反

(3)BclI和SmaI防止酶切后的质粒自身环化，保证OsMYB56和酶切后的质粒定向连接T4DNA连接酶（仅答出DNA连接酶不得分）

(4)四环素含未重组Ti质粒（或普通Ti质粒）的受体细胞也能正常生长

【分析】PCR技术可特异性的扩增DNA片段，关键在于引物可以和特定DNA片段的3端特异性结合，使耐高温的DNA聚合酶酶沿引物的3端延伸子链。基因表达载体一般包括启动子、终止子、目的基因、标记基因、复制原点等元件。

【详解】（1）DNA分子有2条链构成，每一条链都有3端与5端，-OH端为3，磷酸基团的末端为5，因此OsMYB56基因游离的磷酸基团侧为5端，羟基端为3端。过程①PCR扩增OsMYB56基因时加入的酶是Taq，该酶能催化磷酸二酯键的形成。在进行PCR操作时，引物应分别基因两条链的3端根据碱基互补配对原则结合，根据图中两端序列，通常选择5′-CTTGGATGAT-3′(上面链的引物)和5′-TCTGTTGAAT-3′(下面链的引物)作为引物对，①④正确。

（2）根据基因表达载体的结构组成分析，在每个目的基因的前面要有启动子，后面要有终止子，因此CaMV35S是启动子，其功能是RNA聚合酶识别并结合的位点，驱动转录的进行。转录从启动子到终止子，CaMV35S是启动子，图中OsMYB56基因和bar基因的终止子位于不同方向，因此基因表达载体中，OsMYB56基因和bar基因编码链的方向相反。

（3）据图可知，质粒中的两个标记基因Tetr和Ampr中都含有限制酶BamHI识别序列，如果用限制酶BamHI，会破坏质粒中的两个标记基因，为防止质粒自身环化，保证OsMYB56和酶切后的质粒定向连接，需要用双酶切，因此过程③可以选择限制酶BclI和SmaI。酶切后的质粒和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒。

（4）据图可知，目的基因和质粒连接后，破坏了氨苄青霉素抗性基因，只保留了四环素抗性基因，为了筛选出含重组质粒的受体细胞，应在添加四环素的选择培养基上培养；含未重组Ti质粒的受体细胞也会正常生长，所以培养后获得的菌落不能判定是否含有重组质粒。

2．（2023春·江苏南通·高三江苏省如皋中学统考阶段练习）人呼吸道合胞病毒（HRSV）是一种单链RNA病毒，下图是构建人呼吸道合胞病毒基因组载体的示意图，下表是相关限制酶的识别序列及切割位点，请回答：

限制酶

BclⅠ

EcoRⅠ

XbaⅠ

Sau3AⅠ

BamHⅠ

识别序列及切割位点

↓GATC

T↓GATCA

G↓AATTC

T↓CTAGA

G↓GATCC

(1)HRSV的基因组为﹣RNA，入侵细胞后在______的催化下合成+RNA。

(2)过程②设计引物时在两种引物的5’端分别添加__