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吾日三省乎吾身。为人谋而不忠乎?与朋友交而不信乎?传不习乎?——《论语》
RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋
白基因cipA和cipB
··········,2025·,·28卷,第3期,第417—421页
GenomicsandAppliedBiology,2009,Vo1.28,No.3,417—421
研究报告
ResearchReport
RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cj!;
唐志如张友明孙志洪黄瑞林印遇龙
中国科学院亚热带农业生态研究所,长沙,410125
通讯作者,*******************
摘要RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cA和cB,为发光光状杆菌
基因敲除提供方
法.采用TOPO克隆方法将基因c/pa和c/pB克隆到质粒pTA上,获得质粒pTA.cipA
和pTA.cipB;采用
Red/ET方法分别将Gentd基因和Aprar基因分别插入pTA.cipA和pTA.cipB的
cA和cipB基因中,并替
换cipA和c基因部分序列,获得pTA—GentalncipA和
pTA.ApralncipB;pTA-GentalncipA通过BamHI酶
切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得GentalncipA,将GentalncipA导入带有质粒
pASK-otl3~/A的luminescens
subsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipA;pTA—
ApralncipB用EcoRI酶
切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得ApralncipB,将ApralncipB导入带有质粒
pASK-ct[3,yA的Pluminescens
subsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipB;42~C
下热激去除突变菌中的质
粒pASK-ett3~/A.克隆PCR和SDS.PAGE电泳结果表明发光光状杆菌晶体蛋白基
去留无意,闲看庭前花开花落;宠辱不惊,漫随天外云卷云舒。——《幽窗小记》
因cA和cipB均被敲
除.采用RED同源重组法成功地敲除了发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB.
关键词发光光状杆菌,RED同源重组,敲除,晶体蛋白
KnockoutoftheCrystallineInclusionProteinGenecandein.一
torhat~dusluminescensbyREDHomologousRecombination
TangZhiruZhangYoumingSunZhihongHuangRuilinYinYulong
InstituteofSubtropicalAgriculture,ChineseAcademyofSciences,Changsha,410125
Correspondingauthor,*******************
DOI:10.3969/gab.028.000417
AbstractStudyontheknockoutofthecrystallineinclusionproteingenecipaandc日
inPhotorhabdusZumi—
nescenssubsp.AkhurstiibyREDhomologousrecombinationprovideag
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