第十章植物细胞培养的基本过程和方法ppt课件.pptxVIP

第十章

植物细胞培养的基本过程和方法;第一节植物细胞的获取;1、外植体的选择：适当生长期的健康植株、细胞之间粘连程度小；叶片组织

2、外植体的前处理：

（1）冲刷材料;流水几分钟-数小时吐温

(2)表面浸润灭菌；超净台70%酒精10-30S

（3）深层灭菌；氯化汞次氯酸钠

（4）无菌水冲洗。3min/次3-10次;二、通过愈伤组织诱导获取植物细胞;怎样从愈伤组织分离得到细胞？;第二节悬浮培养（cellsuspensionculture）

悬浮培养是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基进行培养增殖的技术。

;悬浮细胞生长动态：;细胞生长指标;;①体积选择法：通过细胞体积大小分级，直接将处于相同周期的细胞进行分选，然后将同一状态的细胞继代培养于同一培养体系中。

;③抑制法：通过一些DNA合成抑制剂处理细胞，使细胞滞留在DNA合成前期，当解除抑制后，即可获得处于同一细胞周期—G1期的同步化细胞。;第三节固定化培养;包埋式固定化培养系统：支持物多采用琼脂、琼脂糖、藻酸盐、聚丙烯酰胺等；

吸附式固定化培养系统：支持物采用尼龙网、聚氨酯泡沫、中空纤维等材料。;第四节单细胞培养;1、平板培养

2、看护培养

3、微室培养

4、条件培养（双层滤纸培养）

;1、细胞平板培养

平板培养(plateculture)：将一定密度的悬浮细胞接种到一薄层固体培养基中进行培养的技术。

单细胞的分离：用于平板培养的小细胞团不能超过6个细胞，所以过滤时筛网的网孔大小要合适。

单细胞悬浮液的制备：分离的单细胞经低速离心，培养液洗涤2次后，调整密度为5×105／ml。

植板：将1份已调整好密度的单细胞悬浮液与4份35℃的固体培养基充分混合均匀，然后均匀地平铺于培养皿中，厚度约1~2mm。

封口：用石蜡膜封培养皿。;;3、微室培养;4、双层滤纸培养

Horsch等（1980）将平板培养与饲养层培养技术相结合，建立了双层滤纸植板培养方法。;第五节原生质体培养;原生质体的制备;1、用于分离原生质体材料的准备;2、预处理与酶解;酶处理：

酶浓度

酶解时间

酶解温度

;3、原生质???的收集和纯化;4、原生质体活力检测

;原生质体培养方法