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食品补充检验方法

BJS202108

蜂蜜中雷公藤甲素的测定

2021-07-28发布

国家市场监督管理总局发布

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BJ犛202108

蜂蜜中雷公藤甲素的测定

1范围

本方法规定了蜂蜜中雷公藤甲素的液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于蜂蜜中雷公藤甲素的定性和定量测定。

2原理

试样中雷公藤甲素（雷公藤内酯醇）经乙酸乙酯提取，N-丙基乙二胺固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。

3试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。3.1试剂

3.1.1甲醇(CH3OH)：色谱纯。

3.1.2乙酸乙酯(C4H8O2)。

3.1.3甲酸(HCOOH)：色谱纯。3.2溶液配制

3.2.1甲醇溶液：甲醇∶水(1+1,体积比）。

3.2.20.1%甲酸溶液：1mL甲酸溶解于水中，并定容至1L。

3.3标准品

雷公藤甲素(Triptolide,C20H24O6,CAS号：38748-32-2)标准品：纯度≥98%。

3.4标准溶液制备

3.4.1雷公藤甲素标准储备液(1mg/mL)：准确称取雷公藤甲素标准品20.0mg于10mL烧杯中，用

甲醇溶解后转移到20mL容量瓶中，并用甲醇定容。4℃避光保存，有效期1个月。

3.4.2雷公藤甲素标准中间液(1μg/mL)：准确量取雷公藤甲素标准储备液(1mg/mL)(3.4.1)100μL,置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为1μg/mL的雷公藤甲素标准中间液。4℃避光保存，有效期1个月。

3.5材料

3.5.1离心管：50mL。

3.5.2N-丙基乙二胺固相萃取柱(500mg/6mL)或其他等效柱。3.5.3微孔滤膜：0.22μm,有机系。

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4仪器和设备

4.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾(ESI)离子源。

4.2分析天平：感量0.0001g和0.001g。

4.3氮吹仪。

4.4涡漩混合器。

4.5固相萃取装置。4.6超声波清洗器。

4.7离心机：转速≥10000r/min。

4.8旋转蒸发器。

4.9移液器：100μL,1mL,5mL。

5分析步骤

5.1试样的制备与保存

对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀。对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于低于60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时应注意防止水分挥发。装入洁净容器，密封，标明标记。

5.2试样的处理5.2.1提取

称取试样2g（精确至0.001g)置于50mL离心管中，加入4mL水与蜂蜜充分混匀，加入乙酸乙酯15mL,涡漩振荡5min,超声10min,以10000r/min离心5min,取上清液，沉淀再加入乙酸乙酯15mL,重复提取1次，合并上清液，旋转蒸发至干。

5.2.2净化

残渣用2mL乙酸乙酯溶解，过N-丙基乙二胺固相萃取柱，用乙酸乙酯5mL洗脱，收集洗脱液，氮气吹干。准确量取甲醇溶液1mL溶解残余物，经0.22μm微孔滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

5.3基质标准工作曲线的制备

准确量取雷公藤甲素标准中间液(1μg/mL)适量，用空白样品提取液溶解稀释，配制成雷公藤甲素

质量浓度为0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的系列基质标准工作溶

液，或根据需要配制适当浓度的基质标准工作溶液；现配现用。以基质标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制基质标准工作曲线。

5.4液相色谱-串联质谱测定

5.4.1液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：C18柱，75mm×3.0mm,粒径2.7μm,或性能相当者。

b)流动相：A为0.1%甲酸溶液，B为甲醇。梯度洗脱程序见表1。

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