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食品补充检验方法

BJS202008

蘑菇中α-鹅膏毒肽等6种蘑菇毒素的测定

2020-11-19发布

国家市场监督管理总局发布

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蘑菇中α-鹅膏毒肽等6种蘑菇毒素的测定

1范围

本方法规定了蘑菇中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽、羧基三羟基鬼笔毒肽和二羟基鬼笔毒肽6种蘑菇毒素的液相色谱-串联质谱测定方法。

本方法适用于蘑菇中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽、羧基三羟基鬼笔毒肽和二羟基鬼笔毒肽6种蘑菇毒素的测定。

2原理

试样经甲醇提取，提取液经氮吹后以水复溶，正己烷脱脂，水溶液经HLB固相萃取柱净化后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。

3试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂

3.1.1甲醇(CH3OH)：色谱纯。

3.1.2乙腈(CH3CN)：色谱纯。

3.1.3正己烷(C6H14)。

3.1.4甲酸铵(HCOONH4)：色谱纯。

3.1.5固相萃取小柱(60mg/3mL):HLB柱或相当者，使用前依次用3mL甲醇、3mL水活化。

3.2试剂配制

3.2.1甲醇水溶液(5+95,体积比）：量取5mL甲醇(3.1.1),用水稀释至100mL。

3.2.2乙腈甲醇溶液(30+70,体积比）：量取30mL乙腈(3.1.2)和70mL甲醇(3.1.1),混匀。

3.2.3甲酸铵溶液(5mmol/L)：称取甲酸铵(3.1.4)0.315g,用水溶解后定容至1000mL,滤膜过滤后

备用。

3.3标准品

α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽、羧基三羟基鬼笔毒肽和二羟基鬼笔毒肽标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量参见附录A,各标准品纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.4标准溶液配制

3.4.1标准储备液(1000mg/L)：准确称取α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽、羧基三羟基鬼笔毒肽和二羟基鬼笔毒肽标准品(3.3)各10mg（精确至0.1mg),分别置于10mL容量瓶中，用甲醇(3.1.1)溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为1000mg/L的标准储备液，-18℃保

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存。有效期3个月。

3.4.2混合标准中间液(10.0mg/L)：分别准确吸取上述6种标准品的标准储备液(3.4.1)各1mL,置

于同一容量瓶中，用甲醇(3.1.1)稀释至100mL,摇匀，制成混合标准中间液，0℃~4℃保存。有效期1个月。

3.4.3混合标准工作液：分别准确吸取混合标准中间液(3.4.2)适量，用初始流动相稀释，摇匀，作为系

列混合标准工作溶液，质量浓度依次为各化合物5.00ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL,临用新制或依仪器响应情况配制适当浓度的混合标准工作溶液。

3.5材料

3.5.1微孔滤膜：有机系，微孔孔径0.22μm。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

4.2分析天平：感量分别为0.1mg和0.001g。

4.3固体样品粉碎机。4.4超声波清洗器。

4.5涡漩振荡器。

4.6离心机：转速不低于8000r/min。

4.7固相萃取装置。4.8氮吹仪。

4.9恒温干燥箱。5分析步骤

警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在整个实验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施。

5.1试样制备

选取适量具有代表性试样，尽可能切碎，置于85℃恒温干燥箱中干燥4h,经粉碎机粉碎，充分混匀后置于洁净容器中密封保存。

5.2试样前处理

5.2.1提取：准确称取0.4g（精确至0.0