小麦粉中间苯二酚的测定 高效液相色谱法.docx

食品补充检验方法

BJS202009

小麦粉中间苯二酚的测定高效液相色谱法

2020-11-19发布

国家市场监督管理总局发布

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BJ犛202009

小麦粉中间苯二酚的测定高效液相色谱法

1范围

本方法规定了小麦粉中间苯二酚含量的液相色谱测定方法。本方法适用于小麦粉中间苯二酚的测定。

2原理

试样中的间苯二酚经甲醇提取，蛋白沉淀剂沉淀，采用液相色谱C18-Amide柱分离，荧光检测器检

测，外标法定量。3试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。3.1试剂

3.1.1甲醇(CH3OH)：色谱纯。

3.1.2亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。

3.1.3乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]。

3.1.4冰醋酸(CH3COOH)。3.2试剂配制

3.2.1亚铁氰化钾溶液(92g/L)：称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000mL。

3.2.2乙酸锌溶液(183g/L)：称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰醋酸，用水定容至

1000mL。3.3标准品

3.3.1间苯二酚标准品(C6H6O2,CAS号：108-46-3,相对分子质量110.00)或经认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.4标准溶液的配制

3.4.1间苯二酚标准储备液(1.00mg/mL)：准确称取间苯二酚标准品(3.3.1)10mg（精确至0.1mg),用甲醇(3.1.1)溶解，配制成质量浓度为1.00mg/mL标准储备液，-18℃避光保存，不超过2周。

3.4.2标准中间液：准确移取1.00mL间苯二酚标准储备液(3.4.1)于10mL和100mL容量瓶中，用甲醇(3.1.1)稀释至刻度，摇匀，制备质量浓度为100μg/mL和10.0μg/mL的标准中间液。临用现配。

3.4.3标准工作溶液：吸取间苯二酚标准中间液(3.4.2),用甲醇(3.1.1)稀释成质量浓度分别为

0.0100μg/mL、0.0200μg/mL、0.100μg/mL、0.500μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL

标准工作溶液。临用现配。

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3.5材料

3.5.1微孔滤膜：有机相，孔径0.22μm。

3.5.2比色管：25mL。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱仪，配荧光检测器。

4.2电子天平：感量分别为0.1mg和0.001g。

4.3涡漩振荡器。

4.4超声波清洗器。4.5高速离心机。

4.6样品粉碎机。

5试样制备与保存

取代表性的试样不少于200g,装入洁净容器内密封并做好标识，置于阴凉干燥处保存。

6测定步骤6.1试样处理

称取5g试样（精确至0.001g)于25mL比色管中，加入15mL甲醇(3.1.1)涡漩混匀，超声15min,放置至室温后加入1mL亚铁氰化钾溶液(3.2.1)和1mL乙酸锌溶液(3.2.2),用甲醇定容至刻度，混匀1min。于7000r/min离心3min,取适量上清液过0.22μm有机相滤膜，待液相色谱测定。

6.2仪器参考条件

仪器参考条件如下：

a)色谱柱：C18-Amide(150mm×4.6mm,3μm)或性能相当者；

b)流动相：A为水，B为甲醇，梯度洗脱条件见表1;

c)柱温：40℃;

d)进样体积：10μL;

e)荧光检测器，激发波长273nm,发射波长304nm;增益值：无增益。

表1梯度洗脱程序

时间/min

流速/(mL/min)

A/%

B/%

0.01

0.70

98.0

2.0

10.00

0.70

60.0

40.0

11.00