《布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法》征求意见稿.pdf

ICSS65.020.30

备案号：

团体标准

T/CVMAXXXXX—XXXX

氏滴式数字PCR检测方法

布鲁菌微

MethodOfDropletDigitalPCRForDetectionOfBrucellaspp

见）

（征求意稿

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

XX/TXXXXX—XXXX

布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法

1范围

本文件规定了布鲁氏菌(Brucellaspp.微

)滴式数字PCR检测方法的原理、试剂与耗材、仪器与设备、

操作步骤、结果分析。

鲁氏核酸检测。

产物环境样品等样本中布菌

品、脏、肝脏、淋巴结、流、

本件适用于动物血液样脾

文

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生要

物安全用求

通

第部分：试验方法标准

GB/T20001.4-2015标准编写规则4

GB/T18646动物布鲁氏菌病断

诊标准

NY/T16

47奶牛布氏菌病

鲁PCR诊断技术

3原理

微滴式数字PCR（DropletDigitalPCR，ddPCR）的技术原理是利用微滴化技术将一份反应体系分成

数万个纳升级的微滴进行定量PCR检测，本质上是将传统定量PCR的一次检测变成数万次检测，提高了

核酸序列检测的灵敏度和精准度。微滴发生器可以将每一份扩增体系分成数万个均匀的纳升级微滴，每

个微滴不含或者含有一个至数个待检核酸靶分子。每个微滴都将作为一个独立的PCR扩增体系，在PCR

扩增仪上进行终点PCR扩增。利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，

没有荧光信号的微滴判读为0。根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，计算出待检靶分子的浓度或拷

贝数。

4试剂与耗材

1

XX/TXXXXX—XXXX

4.1提取

宜选取商品化的细菌基因组DNA提取试剂盒，或选用其他等效提取核酸方法。

4.2微滴式数字PCR扩增试剂

宜按照不同的微滴式数字PCR平台的说明书选取推荐的微滴式数字PCR扩增试剂。

4.3引物和探针

Brucella上游引物(BruF)：5＇-cgctcgcgcggtggat-3＇

Brucella下游引物(BruR)：5＇-cttgaagcttgcggacagtc