《玉米孢囊线虫鉴定和监测技术规程》（征求意见稿）.docx

ICS65.020.01CCSB16

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河南省地方标准

DB41/TXXXX—XXXX

玉米孢囊线虫鉴定和监测技术规程

（征求意见稿）

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

河南省市场监督管理局发布

I

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目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试剂和设备 1

5鉴定方法 2

6监测方法 3

7调查记录 4

附录A（资料性）玉米孢囊线虫危害症状和形态学特征 5

附录B（资料性）玉米孢囊线虫病调查表 7

参考文献 9

II

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由河南省农业农村厅提出。

本文件由河南省植物保护标准化技术委员会（HN/TC32）归口。

本文件起草单位：河南农业大学、河南省植物保护检疫站、中国农业科学院植物保护研究所。

本文件主要起草人：崔江宽、汤继华、彭红、李好海、彭德良、焦永吉、彭焕、蒋士君、周扬、孟颢光、张雪海。

1

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玉米孢囊线虫鉴定和监测技术规程

1范围

本文件规定了玉米孢囊线虫鉴定和监测的术语和定义、试剂和设备、鉴定方法、监测方法、调查记录等内容。

本文件适用于玉米孢囊线虫（Heteroderazeae）的鉴定和监测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

SN/TSN/TNY/T

1848

2757

3533

植物有害生物鉴定规范植物线虫检测规范

小麦孢囊线虫鉴定和监测技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

玉米孢囊线虫

为害玉米和多种禾本科作物、杂草的一类世界性重要作物孢囊线虫。该线虫属于垫刃亚目异皮科异皮属，危害玉米并引起玉米孢囊线虫病。

3.2

孢囊

孢囊类线虫发育过程中的特殊阶段，是雌虫老化死亡后形成的浅褐色或黄棕色虫体，孢囊体内包含几百个线虫卵粒。

3.3

阴门锥

位于孢囊尾部，包含会阴部及其有关内部结构，是孢囊线虫分类的重要依据。3.4

严重度

表示植株根系患玉米孢囊线虫病的轻重程度。严重度用分级法表示，即将发病的严重程度由轻到重划分出几个级别，分别用各级代表值或百分率表示。

4试剂和设备

4.1主要试剂

高岭土、蔗糖、酸性品红、TAF固定液、加拿大树胶、玉米孢囊线虫SCAR-PCR引物、rTaq酶、PCR扩增试剂盒等。

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4.2主要设备

4.2.120目、100目和500目标准筛网。

4.2.2体视显微镜（10～100倍）和生物显微镜（40～1000倍）。

4.2.3台式低速离心机（最大转速6000r/min）。

4.2.4常规PCR仪、电泳仪和凝胶成像仪。

5鉴定方法

5.1基本要求

玉米孢囊线虫的鉴定应符合SN/T1848的要求，检测应符合SN/T2757的要求。

5.2现场诊断

肉眼观察玉米等作物地上部分是否出现黄化、矮化，叶色暗淡，叶边缘焦黄等症状；根部是否有晶莹的白色粒状物；根系生长发育不良，现场诊断为疑似玉米孢囊线虫。危害症状参见附录A。

5.3样品采集

玉米出现萎缩、矮小、叶片发黄、发育不良，采集植株根系和根际土样品带回实验室，进行室内线虫种类鉴定。

5.4形态学鉴定

5.4.1孢囊和二龄幼虫分离

样品中孢囊的分离采用蔗糖简易离心法，二龄幼虫（J2）分离采用浅盘法。分离方法参考NY/T3533—2020的方法。

5.4.2玻片制作

按照SN/T2757—2022和NY/T3533—2020的方法，分离获得的线虫制作临时玻片进行快速种类鉴定，如需进一步观察和鉴定重要线虫种类，则需要制成永久玻片长期保存。

5.4.3形态观察

在显微镜下观察孢囊、二龄幼虫（J2）、雌虫和雄虫等玉米孢囊线虫不同虫态的形态特征，拍照，并在每张图上加对应比例尺。

5.4.4形态学鉴定

以孢囊的形态学特征作为该线虫鉴定的主要依据，二龄幼虫（J2）和雄虫作为鉴定的辅助依据。具体描述详见附录A。

5.4.5分子生物学