动物源性食品中瓜尔胶的测定.docx

食品补充检验方法

BJS202301

动物源性食品中瓜尔胶的测定

2023-06-13发布

国家市场监督管理总局发布

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BJS202301

动物源性食品中瓜尔胶的测定

1范围

本方法规定了猪肉、牛肉、羊肉中瓜尔胶的液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于猪肉、牛肉、羊肉中瓜尔胶的测定。

2原理

样品及标准品经β-甘露聚糖酶酶解,加入乙腈沉淀蛋白后离心,上清液经过中性氧化铝柱净化,用液相色谱-串联质谱仪检测酶解产物特征寡糖,外标法测定瓜尔胶含量。

3试剂和材料

除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。

3.1.2磷酸氢二钠(Na2HPO4)。

3.1.3一水合柠檬酸(C6H8O7●H2O)。

3.1.4β-甘露聚糖酶(CAS:37288-54-3):≥98%,酶活力10000U/g。

3.2试剂配制

3.2.1磷酸氢二钠溶液(0.2mol/L):称取14.2g磷酸氢二钠(3.1.2),用水溶解并稀释至500mL。

3.2.2柠檬酸溶液(0.1mol/L):称取21.0g一水合柠檬酸(3.1.3),用水溶解并稀释至1000mL。

3.2.3Mcllvaine缓冲溶液:量取678mL柠檬酸溶液(3.2.2)于1000mL烧杯中,加入322mL磷酸氢二钠溶液(3.2.1),混匀。

3.2.4β-甘露聚糖酶溶液(0.2mg/mL):称取0.01gβ-甘露聚糖酶(3.1.4)于具塞试管中,加入50mLMcllvaine缓冲溶液(3.2.3),混匀。临用现配。

3.3标准品

瓜尔胶:纯度≥98.5%。瓜尔胶的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和结构式见附录A。

3.4标准溶液配制

标准溶液(1.0mg/mL):准确称取瓜尔胶标准品(3.3)0.1g(精确至0.0001g),用水溶解并定容至100mL,混匀。临用现配,使用时再次摇匀。

3.5材料

3.5.1固相萃取柱:中性氧化铝柱,500mg/6mL,或性能相当者。

3.5.2微孔滤膜:有机滤膜,孔径0.22μm。

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4仪器和设备

4.1液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。

4.2多管涡旋混合仪。

4.3高速冷冻离心机:转速≥12000r/min。

4.4恒温水浴振荡器。

4.5电子天平:感量分别为0.01g和0.0001g。

4.6组织粉碎机。

4.7固相萃取装置。

5分析步骤

5.1试样的制备与保存

空白或供试样品,约200g,取瘦肉部分,用组织粉碎机(4.6)均质,得到糜状试样,—18℃及以下保存。

取均质的供试样品,作为供试试样。取均质的空白样品,作为空白试样。

5.2试样的处理

5.2.1酶解

称取试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中,依次加入8mLMcllvaine缓冲溶液(3.2.3)和0.5mLβ-甘露聚糖酶溶液(3.2.4),加盖后涡旋10min,放入55℃±5℃恒温水浴振荡器中酶解7h~16h,取出冷却后于4℃12000r/min离心5min,将上清液转移至玻璃试管中,在沸水浴中加热10min,冷却后转移至10mL比色管中,加水至刻度线,混匀后取1.00mL于离心管中,加入1.00mL乙腈(3.1.1)混匀,4500r/min离心2min,取上清液待净化。

5.2.2净化

取1.00mL待净化液,通过中性氧化铝柱(3.5.1,无需活化),用刻度管接收流出液,再用2mL水洗脱,合并接收液。将接收液用乙腈(3.1.1)补足至4mL,混匀后过0.22μm微孔滤膜(3.5.2),供测定。

5.3基质加标标准工作曲线的制备

分别精确移取标准溶液(3.4)适量,用水稀释,配制成质量浓度