黄曲霉毒素测定的其他方法——高效液相色谱-柱前衍生法.docx

黄曲霉毒素测定的其他方法——高效液相色谱-柱前衍生法

1.原理

试样中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2,用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液的混合溶液提取,提取液经黄曲霉毒素固相净化柱净化去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质,净化液用三氟乙酸柱前衍生,液相色谱分离,荧光检测器检测,外标法定量。

2.试剂和材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

2.1试剂

甲醇(CH3OH):色谱纯，乙腈(CH3CN):色谱纯，正已烷(C6H14):色谱纯，三氟乙酸(CF3COOH)。

2.2试剂配制

乙腈-水溶液(84+16):取840mL乙腈加人160mL水。

甲醇-水溶液(70+30):取700mL甲醇加入300mL水。

乙腈-水溶液(50+50):取500mL乙腈加人500mL水。

乙腈-甲醇溶液(50+50):取500mL乙腈加入500mL甲醇。

2.3标准品

AFTB1标准品(C17H12O6,CAS号:1162-65-8):纯度≥98%,或有证的标准物质。

AFTB2标准品(C17H14O6,CAS号:7220-81-7):纯度≥98%,或有证的标准物质。

AFTG1标准品(C17H12O7,CAS号:1165-39-5):纯度≥98%,或有证的标准物质。

AFTG2标准品(C17H14O7,CAS号:7241-98-7):纯度≥98%,或有证的标准物质。

注:标准物质可以使用满足溯源要求的商品化标准溶液。

2.4标准溶液配制

标准储备溶液(10μg/mL):分别称取AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG21mg(精确至

0.01mg),用乙腈溶解并定容至100mL。此溶液浓度约为10μg/mL。溶液转移至试剂瓶中后,在-20℃下避光保存,备用。临用前进行浓度校准(校准方法参见附录A)。

混合标准工作液(AFTB1和AFTG1:100ng/mL,AFTB2和AFTG2:30ng/mL):准确移取

AFTB1和AFTG1标准储备溶液各1mL,AFTB2和AFTG2标准储备溶液各300μL至100mL容量瓶中,乙腈定容。密封后避光-20℃下保存,三个月内有效。

标准系列工作溶液:分别准确移取混合标准工作液10μL、50μL、200pμL、500μL、1000μL、2000μL、4000μL至10mL容量瓶中，用初始流动相定容至刻度(含AFTB1和AFTG1浓度为0.1ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL,AFTB2和AFTG2浓度为0.03ng/mL、0.15ng/mL、0.6ng/mL、l.5ng/mL、3.0ng/mL、6.0ng/mL、12ng/mI的系列标准溶液)。

3.仪器和设备

匀浆机，高速粉碎机，组织捣碎机，超声波/涡旋振荡器或摇床。

天平:感量0.01g和0.00001g。

涡旋混合器，高速均质器:转速6500r/min~24000r/min。

离心机:转速≥6000r/min，氮吹仪。

玻璃纤维滤纸:快速、高载量、液体中颗粒保留1.6μm。

液相色谱仪:配荧光检测器。

色谱分离柱。筛网:1mm~2mm试验筛孔径。

黄曲霉毒素专用型固相萃取净化柱(以下简称净化柱),或相当者。

一次性微孔滤头:带0.22μm微孔滤膜(所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象,方可使用)。

恒温箱，pH计。

4.分析步骤

4.1样品制备

【液体样品】(植物油、酱油、醋等)

采样量需大于1L,对于袋装、瓶装等包装样品需至少采集3个包装(同一批次或号),将所有液体样品在一个容器中用匀浆机混匀后,取其中任意的100g(mL)样品进行检测。

【固体样品】(谷物及其制品、坚果及籽类、婴幼儿谷类辅助食品等)

采样量需大于1kg,用高速粉碎机将其粉碎,过筛,使其粒径小于2mm孔径试验筛,混合均匀后缩分至100g,储存于样品瓶中,密封保存,供检测用。

【半流体】(腐乳、豆豉等)

采样量需大于1kg(L),对于袋装、瓶装等包装样品需至少采集3个包装(同一批次或号),用组织捣碎机捣碎混匀后,储存于样品瓶中,密封保存,供检测用。

4.2样品提取

4.2.1液体样品

4.2.1.1植物油脂

称取5g试样(精确至0.01g)于50mL离心管中,加入20mL乙腈-水溶液(84+16)或甲醇-水溶液(70+30),涡旋混匀,置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min(或用均质器均质3min),在6000r