DB33T 2183-2019 家蚕核型多角体病抗性鉴定方法　.docxVIP

ICS65.020.30B40

DB33

浙江省地方标准

DB33/T2183—2019

家蚕核型多角体病抗性鉴定方法

Regulationofidentificationforsilkwormnuclearpolyhedrosisresistance

2019-01-15发布2019-02-15实施

浙江省市场监督管理局发布

DB33/T2183-2019

I

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由浙江省农业农村厅提出。

本标准由浙江省种植业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：浙江大学蚕蜂研究所、浙江大学农业技术推广中心、浙江省农业技术推广中心、浙江省蚕种质量检验检疫站、浙江省农业科学院蚕桑研究所、桐乡市蚕业有限公司、浙江省种植业管理局。

本部分主要起草人：鲁兴萌、周金钱、邵勇奇、楼霞、赵新华、谷利群、王永强、徐杰、张三妹、黄衍峰。

DB33/T2183-2019

1

家蚕核型多角体病抗性鉴定方法

1范围

本标准规定了家蚕核型多角体病抗性鉴定的术语和定义，家蚕核型病毒多角体试验用悬浮液的制备、计数及保存，半数致死浓度测定，抗性鉴定评价。

本标准适用于家蚕一代杂交种的核型多角体病抗性评价。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定DB33/T2019蚕种生产技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。3.1

家蚕核型多角体病病毒bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirus为杆状病毒科、真杆状病毒亚科、核型多角体病毒属的一种。

3.2

家蚕核型多角体病病毒多角体bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirusandinclusionbody

家蚕核型多角体病病毒在家蚕体内繁殖后，形成包埋了大量病毒的多角体，在生物光学显微镜下呈六角形，并具有较强折光性。

3.3

家蚕核型多角体病silkwormnuclearpolyhedrosis

核型多角体病病毒在家蚕体内大量繁殖，蚕体呈乳白色、体躯肿胀、狂躁爬行、体壁易破典型病征，或致死的病害。

DB33/T2183-2019

2

3.4

半数致死浓度medianlethalconcentration（LC50）

在规定时间内，通过添食攻毒感染，使2龄家蚕半数死亡所需的病毒多角体浓度。

3.5

攻毒challengetest

以人工添毒的方法，将病毒多角体悬浮液均匀涂抹于桑叶背面，喂饲家蚕使之感染。3.6

抗性指数resistanceindex

用于衡量参试蚕品种抗性的指数，以参照品种LC50平均值为100R。

4家蚕饲养

按DB33/T2019中简化催青的要求催青，常规饲养至2龄起蚕。

5家蚕核型病毒多角体试验用悬浮液的制备、计数及保存

5.1悬浮液的制备

5.1.1添食

将纯化的病毒多角体，用蒸馏水配成1×106个/毫升浓度的攻毒液。取3片大小约10cm×10cm清洁桑叶，用脱脂小棉球蘸取5ml，均匀涂抹在每片桑叶背面，喂饲100头4龄起蚕，基本食净后(约12h)，改用清洁桑叶喂饲。在24℃~25℃的温度下，饲养7d～10d备用。

5.1.2制备

从饲养的攻毒蚕中，选择有体色乳白和体躯肿胀典型病征，但尚未出现狂躁爬行病症和皮破之前，用剪刀从病蚕的腹足或尾角收集其体液，经2层脱脂纱布过滤，然后将滤液用3000r/min离心10min，弃上清；沉淀用无菌生理盐水充分悬浮后，再用3000r/min离心10min，弃上清；重复离心3次～5次，至沉淀呈较为均质的乳白色，再用少量无菌生理盐水充分悬浮，即成病毒多角体悬浮液。

5.2病毒多角体的计数

用血球计数板计数病毒多角体悬浮液中多角体的数量，并用无菌生理盐水调成1×109个/毫升的病毒多角体悬浮液母液，直接使用或置4℃冰箱内备用。

5.3病毒多角体悬浮液的保存

5.3.1保存方法

3

DB33/T2183-2019

将病毒多角体悬浮液置4℃保存。

5.3.2保存时间

病毒多角体悬浮的有效保存时间为≤2年。

6半数致死浓度测定

6.1攻毒用多角体悬浮液的配制

将病毒多角体悬浮液母液(1×10个/毫升)用无菌生理盐水稀释成1