叶绿体中色素的提取和分离.ppt

实验6：叶绿体中色素的提取和分离

马山县周鹿中学陆保宗二、实验原理（一）叶绿体色素：1.叶绿素2.类胡萝卜素叶绿素a叶绿素b胡萝卜素叶黄素3:1(阳生)２:1(阴生)2：13：1叶绿素a、b的结构式类胡萝卜素的结构式0102均为亲脂性亲水性，叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素。∴根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度：叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素。∴均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。极性大小：（二）四种色素的化学性质（二）叶绿素的光学性质叶绿素的吸收光谱类胡萝卜素的吸收光谱叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮、无水乙醇等能提取色素。层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，分子量小的溶解度高，随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。所以用层析液来分离四种色素。12实验原理：材料：新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片)。仪器：干燥的定性滤纸，烧杯(100mL)，研钵玻璃漏斗，尼龙布（或棉花），毛细吸管，剪刀，小试管，培养皿盖，药勺，量筒(10mL)，天平，镊子，铅笔，尺子。药品：丙酮，层析液，二氧化硅，碳酸钙。实验材料用具：123称：用天平称量5g除去叶柄的叶片剪：越细越好，尽量去除叶脉等部分加药品：加少量二氧化硅，碳酸钙和丙酮（约5mL）快速充分研磨。123提取叶绿素的步骤?：实验过程：磨：研磨要领是要用力压快速研磨。过滤：用纱布（或棉花）、漏斗和试管，最后提取液置于试管中待用，及时用棉塞（或塞子）将试管塞严.制备滤纸条：将预备在试验桌上的滤纸条一端剪去两个角作标记，在距离这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。01画滤液细线：沿铅笔线轻轻均匀地画一道线，用提取液反复划好几次，每次划完尽量吹干，不要弄破纸条。022、分离色素的步骤层析分离叶绿体中的色素：将3mL层析液倒入烧杯中，注意将纸条画有滤液细线的一端置于烧杯中的层析液中，注意千万不要将滤液细线浸没在层析液中。观察实验结果：最后滤纸条上将分离出四条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。实验结果：问题讨论：1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么？二氧化硅的作用是使研磨更加充分、迅速；碳酸钙的作用是保护叶绿素不分解滤液含有丙酮，丙酮有毒，防止挥发将滤液放在试管中，为什么要及时用棉塞将试管塞严？增加色素的含量，使分离后的色素带更加清晰滤液细线时重复画几次的目的是什么？01为什么不能让滤液细线触及层析液？02层析液会溶解色素使色素无法分离。01观察实验结果有什么现象？滤纸条上出现了几条色素带？每条色素带的颜色和排序如何？02滤纸条上将分离出四条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是胡萝卜素（最快）、叶黄素、叶绿素a（最多）和叶绿素b（最慢）。二、实验原理（一）叶绿体色素：1.叶绿素2.类胡萝卜素叶绿素a叶绿素b胡萝卜素叶黄素3:1(阳生)２:1(阴生)2：13：1绿叶中的色素类胡萝卜素（含量约1/4）叶绿素（含量约3/4）胡萝卜素（橙黄色）叶黄素（黄色）叶绿素a（蓝绿色）叶绿素b（黄绿色）01选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片.(如菠菜叶)02画滤液细线时应以细、齐、直为标准，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复2-3次。03层析时不要让滤液细线触及层析液。实验关键:通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现四条色素带，从上到下依次为（）胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素A随堂演练：