免疫学检测技术的基本原理.pptVIP

免疫荧光技术(immunofluorescencetechnique)常用荧光素：异硫氰酸荧光素(FITC)藻红蛋白(PE)直接荧光法间接荧光法放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)化学发光免疫技术免疫胶体金技术免疫印迹技术(Westernblotting)SDSSDS：十二烷基硫酸钠，一种阴离子表面活性剂，可使蛋白质的氢键和疏水健打开，与之形成蛋白质－SDS复合物。由于SDS带有负电荷，消除了不同蛋白质间原有的电荷差异，使蛋白质分子在凝胶中的迁移率主要取决于它的分子量。通常采用不连续电泳系统，通过电荷效应，浓缩效应和分子筛效应，达到蛋白质高分辨率的分离效果。4.蛋白质芯片技术快速、准确、高通量的检测技术第三节免疫细胞功能的检测（细胞免疫检测）一、免疫细胞的分离葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法二、免疫细胞功能的测定T细胞功能测定B细胞功能测定(1)抗凝静脉血(2)加等量NS(4)密度梯度离心血浆分离液RBCPBMCPMN(3)混匀后，缓慢加于分离液上T细胞功能测定T细胞增殖试验形态计数法：T细胞受到有丝分裂原刺激，出现体积增大、细胞形态不规则、胞质增多、细胞核松散并出现多个核仁等形态变化。3H-TdR掺入法MTT法淋巴细胞转化试验（形态学示意图）原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体，T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。PHA刺激48~72小时淋巴细胞增殖—3H-TdR掺入法原理：将单个核细胞中加入PHA共同培养，在终止培养前8~15小时加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR),经β-液体闪烁仪检测淋巴细胞DNA的3H-TdR掺入量，推测淋巴细胞增殖的程度。培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图MTT(四甲基偶氮唑盐）法原理：在细胞培养终止前数小时加入MTT，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶分解MTT产生蓝色甲攒（Formazan)沉积于细胞内或细胞周围，形成甲攒的量与细胞增殖程度成正相关。E-玫瑰花结试验示意图迟发型超敏反应(DTH)的检测添加标题01常用于检测：病原微生物感染、免疫缺陷病和肿瘤患者的免疫功能测定。添加标题02常用皮试制剂：结核菌素、念珠菌素等。添加标题03B细胞功能测定各类Ig的测定：单扩、试管法、比浊法、ELISA等；抗体形成细胞测定：溶血空斑试验、ELISPOT法酶联免疫斑点法

（Enzyme-LinkedImmunospot,ELISPOT)是在ELISA的基础上建立的检测抗体生成细胞及细胞因子产生细胞的方法。CK抗体包被的反应板CK抗原包被的反应板加入淋巴细胞加入酶标记二抗加入底物检测抗原特异性B细胞加入底物T细胞产生CK的检测加入淋巴细胞加入酶标的CK抗体3.细胞毒试验检测CTL、NK等细胞杀伤靶细胞活性的一种细胞学技术。51Cr释放法乳酸脱氢酶释放法细胞染色法凋亡细胞检测法：形态学检测法2）琼脂凝胶电泳FACS(流式细胞术:FCM)TUNEL法4.吞噬功能测定中性粒细胞吞噬试验巨噬细胞吞噬试验5.细胞因子的检测生物活性检测法免疫学检测法免疫学预防与治疗第二十三章根据免疫学原理，利用物理、化学和生物学的手段人为地增强或抑制机体的免疫功能，达到预防和治疗疾病目的的措施。免疫学防治章节一免疫学防治Howtogetimmunitytothediseases?自然免疫主动被动人工免疫主动被动特异性免疫获得的方式添加标题自然免疫添加标题人工免疫添加标题自动免疫被动免疫添加标题显性感染隐性感染添加标题胎儿或新生儿从母体获得抗体添加标题主动免疫被动免疫添加标题注射疫苗添加标题注射抗体或细胞因子获得免疫的途径自然主动免疫人工主动免疫自然被动免疫人工被动免疫给机体输入抗原性物质，激活机体的免疫应答，使机体自身产生抵抗疾病的能力。主动免疫（Artificialactiveimmunity）01将对疾病有免疫力的供者的免疫应答产物转移给受者，或自体免疫细胞体外处理后回输自身，以预防或治疗疾病。被动免疫（Artificialpassiveimmunity）02第一节免疫预防疫苗概念：疫苗是利用微生物及其代谢产物，经过人工减毒或