《核酸的分子杂交》课件.pptVIP

**************核酸的分子结构核酸是生物体内重要的生物大分子，主要包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。核酸是由核苷酸单体通过磷酸二酯键连接而成的长链高分子化合物，核苷酸由含氮碱基、戊糖和磷酸组成。DNA双螺旋结构DNA分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸链盘绕而成，形成双螺旋结构。两条链之间通过氢键连接，形成碱基对，A与T配对，G与C配对。DNA双螺旋结构非常稳定，可以有效地保护遗传信息。它还具有自我复制的功能，能够将遗传信息准确地传递给下一代。RNA的结构特点单链结构RNA通常以单链形式存在，但可以形成二级结构，如茎环结构和发夹结构。核糖核苷酸组成RNA由核糖核苷酸组成，包括腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)，与DNA的区别在于核糖上的2羟基。多种形式RNA存在多种形式，包括信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)等，它们在基因表达中发挥着重要作用。核酸碱基的配对规则碱基配对规则核酸中的碱基配对是根据碱基之间的氢键相互作用而形成的。腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T)配对，形成两个氢键。鸟嘌呤(G)与胞嘧啶(C)配对，形成三个氢键。配对原则这种碱基配对规则是DNA双螺旋结构稳定性的基础。它确保了遗传信息的准确复制和传递。核酸杂交的基本原理11.互补序列结合单链核酸序列可以与互补序列配对。22.形成双链结构配对的核酸链形成稳定双链结构。33.杂交过程这种配对过程称为核酸杂交。核酸杂交基于碱基配对原理，利用单链核酸探针与靶核酸序列的互补性，形成稳定的双链结构，从而检测靶核酸的存在。杂交温度与杂交效率的关系50摄氏度理想杂交温度90摄氏度完全解链20摄氏度低温杂交70摄氏度高温杂交杂交温度是影响杂交效率的重要因素之一。温度过低，会导致非特异性杂交，影响检测结果的准确性。温度过高，会导致探针与靶序列解链，降低杂交效率。杂交反应时间与杂交效率的关系杂交反应时间影响杂交效率，时间越长，杂交效率越高。但超过一定时间后，杂交效率不再明显提高，反而可能出现非特异性杂交。离子浓度对杂交反应的影响离子浓度对杂交反应的影响过低杂交效率降低，可能导致假阴性结果过高可能导致非特异性杂交，增加假阳性结果适宜有利于核酸链之间形成稳定的杂交体实验中需要根据具体情况选择合适的离子浓度，以保证杂交反应的最佳效率和特异性。DNA探针的设计与制备序列选择选择特异性强、与靶序列互补的DNA片段，确保探针与目标序列特异性结合，避免非特异性杂交。探针合成使用化学合成方法合成DNA探针，保证探针的纯度和完整性，确保探针的质量和可靠性。标记方法将探针标记上可检测的信号，例如荧光染料或放射性同位素，便于后续检测和分析。纯化步骤纯化探针，去除杂质，提高探针的纯度和特异性，确保实验结果的准确性。RNA探针的设计与制备序列设计RNA探针的序列应与目标RNA序列互补，保证特异性结合。标记方式可选择放射性同位素、生物素或荧光染料等标记，便于检测。制备方法常用的制备方法包括体外转录、化学合成等，根据探针长度和需求选择。质量控制通过电泳、测序等方法验证探针的长度、纯度和活性。核酸杂交检测技术原理基于核酸碱基互补配对原则，利用标记的探针与靶核酸杂交，通过检测杂交信号来检测靶核酸的存在。方法Southern印迹法Northern印迹法原位杂交法核酸芯片技术实时荧光定量PCR技术Northern印迹技术RNA分离将总RNA样本进行电泳分离，根据大小排列。转膜将分离后的RNA从凝胶转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上。探针杂交使用与目标RNA序列互补的标记探针进行杂交。信号检测用放射性自显影或化学发光方法检测杂交信号。Southern印迹技术Southern印迹技术（Southernblotting）是一种用于检测特定DNA序列的技术。该技术使用限制性内切酶将DNA切割成片段，然后将这些片段通过电泳分离。分离后的DNA片段被转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后与标记的DNA探针杂交。如果DNA探针与膜上的特定DNA片段杂交，就可以通过放射自显影或化学发光等方法检测到，从而证明该特定DNA序列的存在。Insitu杂交技术Insitu杂交技术是将标记的核酸探针与细胞或组织中的靶核酸进行杂交，然后通过显微镜观察杂交信号，从而确定靶核酸在细胞或组织中的位置和表达水平的技术。这种技术可以用于研究基因的表达、染色体结构、病毒感染、病原体检测、肿瘤诊断等方面。核酸芯片技术高通