2025年蛋白质分离纯化试题版 .pdfVIP

其身正，不令而行；其身不正，虽令不从。——《论语》

一、已知某生物中一种蛋白质的分子量约为20250················

根据下列要求写出具体的分离纯化方法。

（1）利用溶解度差别进行分离

（2）利用蛋白分子大小进行分离

（3）根据不同的电荷进行分离

（4）利用已制备对的抗体进行分离

（5）蛋白质纯度坚定

答：（1）根据溶解度不同进行分离纯化

影响蛋白质溶解度的外部条件有很多,比如溶液的pH值、离子强度、介电常数和温度等。

但在同一条件下,不同的蛋白质因其分子结构的不同而有不同的溶解度,根据蛋白质分子结

构的特点,适当地改变外部条件,就可以选择性地控制蛋白质混合物中某一成分的溶解度,达

到分离纯化蛋白质的目的。常用的方法有等电点沉淀和pH值调节、蛋白质的盐溶和盐析、

有机溶剂法、双水相萃取法、反胶团萃取法等。

等电点沉淀和pH值调节是最常用的方法。每种蛋白质都有自己的等电点,而且在等电点时

溶解度最低;相反,有些蛋白质在一定pH值时很容易溶解。因而可以通过调节溶液的pH值

来分离纯化蛋白质。

（2）根据分子大小不同进行分离纯化

蛋白质是一种大分子物质,并且不同蛋白质的分子大小不同,因此可以利用一些较简单的方

法使蛋白质和小分子物质分开,并使蛋白质混合物也得到分离。根据蛋白质分子大小不同进

行分离的方法主要有透析、超滤、离心和凝胶过滤等。透析和超滤是分离蛋白质时常用的方

法。透析是将待分离的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液进行分离。超滤是

利用离心力或压力强行使水和其它小分子通过半透膜,而蛋白质被截留在半透膜上的过程。

这两种方法都可以将蛋白质大分子与以无机盐为主的小分子分开。它们经常和盐析、盐溶方

法联合使用,在进行盐析或盐溶后可以利用这两种方法除去引入的无机盐。

（3）根据电荷不同进行分离纯化

根据蛋白质的电荷即酸碱性质不同分离蛋白质的方法有电泳和离子交换层析两类。

在外电场的作用下,带电颗粒(如不处于等电点状态的蛋白质分子)将向着与其电性相反的电

极移动,这种现象称为电泳。聚丙烯酰胺电泳是一种以聚丙烯酰胺为介质的区带电泳,常用于

分离蛋白质。它的优点是设备简单、操作方便、样品用量少。

离子交换层析(Ionexchangechromatography,IEC)是以离子交换剂为固定相,依据流动相中

的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层

析方法。离子交换层析中,基质由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的为阴离子交

换树脂;反之为阳离子交换树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。

（4）利用对配体的特异亲和力进行分离纯化

亲和层析是利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别能力(即生物学亲和力)建立起来的一

种有效的纯化方法。它通常只需一步处理即可将目的蛋白质从复杂的混合物中分离出来,并

且纯度相当高。应用亲和层析须了解纯化物质的结构和生物学特性,以便设计出最好的分离

条件。近年来,亲和层析技术被广泛应用于靶标蛋白尤其是疫苗的分离纯化,特别是在融合蛋

白的分离纯化上,亲和层析更是起到了举足轻重的作用,因为融合蛋白具有特异性结合能力

[20]。

测定蛋白质纯度的5个方法

蛋白质分离纯化的最后一个步骤是鉴定蛋白质样品是否均匀一致。但从

人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

目的蛋白质中检测出少量污染蛋白质远非易事，这是由于污染蛋白质的量可能低

于其分析方法的检测极限，当用一种方法检验蛋白质纯度时，可能有两个或者更