《过柱纯化》课件.pptVIP

*****************课程目标知识学习系统掌握过柱纯化的基本概念、原理和方法。实践能力培养学生熟练操作过柱纯化的技能。问题解决学会识别和解决过柱纯化中的常见问题。什么是过柱纯化分离与纯化过柱纯化是利用色谱原理对样品中的目标物质进行分离和纯化的过程。通过选择合适的固定相及流动相条件，能够有效分离不同成分。色谱设备过柱纯化需要使用色谱仪器如柱色谱、薄层色谱等设备。通过精密的操作和控制,能够实现对样品的高效分离。分离机理过柱纯化依据不同物质的理化性质,如极性、分子量等差异,在固定相和流动相之间达到分配平衡,从而实现分离。过柱纯化的重要性高纯度分离过柱纯化可以从复杂样品中高效分离出目标物质,达到极高的纯度。质量控制过柱纯化过程中可以进行各项质量监控,确保产品的一致性和可靠性。工艺优化通过优化过柱纯化参数,可以进一步提高分离效率和产品收率。规模化生产过柱纯化工艺可实现从实验室到工厂的顺利放大,满足大批量生产需求。过柱纯化的原理亲和作用固定相上的功能基团与目标分子之间形成特异性亲和结合,实现选择性吸附。离子交换固定相带有离子交换基团,与目标离子发生离子交换作用从而实现分离。尺寸排阻不同分子量或大小的目标物质在柱床中流动速率不同而得到分离。过柱纯化的步骤1样品上柱将待纯化的样品缓慢地加载到柱床上2洗脱使用合适的洗脱液对目标物质进行洗脱3样品收集收集洗脱出的目标物质进行后续分析4柱床再生对柱床进行再生,以备下次使用过柱纯化是一个常见的蛋白质和生物大分子分离纯化技术。它包括将样品缓慢加载到柱床上、使用合适的洗脱液洗脱目标物质、收集洗脱液以及对柱床进行再生等步骤。这些步骤的顺序和细节操作都需要精心设计,以确保最佳的分离效果。过柱制备选择合适的填料根据需要分离的物质特性选择最佳的填料材料,如离子交换树脂、亲和凝胶、凝胶滤网等。准备柱体选择合适大小和形状的色谱柱,确保柱体内径均匀、表面洁净且无磨损。填料装填采用适当的方法将填料均匀、紧密地装填到色谱柱中,避免出现通道和气泡。柱床预处理在使用前对柱床进行适当的洗涤和平衡,确保柱床状态良好。过柱操作注意事项柱床平衡确保柱床在装填和洗脱过程中保持平衡和稳定，以防止出现偏斜或压缩。温度控制维持恒定的温度环境,避免温度波动对层析效果产生影响。流速调节根据样品性质调节合适的流速,过高或过低流速会影响分离效果。监测压力密切监控柱床压力变化,防止柱床发生堵塞或破裂。过柱纯化常见问题在实际操作过程中,可能会遇到一些常见的问题,需要及时解决。如柱床堵塞、样品回收率低、分离效果不理想等。这些问题可能源于样品制备不当、流动相配置错误、层析操作不规范等因素。正确识别问题原因,并采取相应的措施,才能确保过柱纯化的顺利进行。离子交换层析离子交换原理离子交换层析利用化合物带电荷的性质,通过静电相互作用实现分离。离子交换树脂对带电荷的离子有特异性吸附。操作流程样品上柱-柱洗脱-流动相收集-检测分析。柱床预处理和溶剂配制至关重要。广泛应用离子交换层析适用于分离和纯化各类离子性化合物,如氨基酸、蛋白质、核酸等,是一种高效的分离手段。亲和层析特异性结合利用蛋白质与其配体或抗原-抗体之间的高度特异性结合,将目标蛋白捕获并富集。温和分离通过改变离子浓度或pH值等条件,可以温和地将目标蛋白从亲和剂上解离下来。高纯度回收亲和层析能够从复杂混合物中高度富集目标蛋白,得到纯度极高的制品。广泛应用亲和层析在生物、医药等领域广泛应用,是分离纯化生物大分子的重要技术。尺寸排阻层析分子量差异尺寸排阻层析基于分子量大小的差异实现分离,能够有效分离不同分子量的生物大分子。柱填料性质柱填料通常为多孔结构,分子能根据大小进入或bypasse孔隙,从而得到分离。分离机理小分子在柱中流经较快,大分子则被滞留,从而实现按分子量的顺序分离。应用范围广尺寸排阻层析适用于蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的分离纯化。反相层析概念介绍反相层析是一种常见的液相色谱技术,它利用非极性固定相与极性溶质之间的亲和力作为分离机制。工作原理基于溶质与固定相之间疏水作用的差异,从而实现对不同组分的分离。适用于分离非极性或弱极性化合物。优势应用反相层析能够高效分离复杂样品中的多种成分,广泛应用于生物医药、食品、环境等领域的分析检测。实际操作通常使用C18、C8等反相填料,流动相常为水-有机溶剂梯度洗脱。需注意流动相pH值对分离的影响。盐析层析盐析原理通过改变溶剂的离子强度,使目标物质沉淀析出的层析技术。应用范围广泛应用于蛋白质、核酸等生物大分子