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平板划线操作⑵平板划线要点①在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环的原因——A.操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;B.每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。②在划线操作结束时,仍需灼烧接种环的原因——划线结束后灼烧接种环能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。③在灼烧接种环之后,要等其冷却后再进行划线的原因——以免接种环温度太高,杀死菌种。④在做第二次以及其后的划线操作时,总是从上一次划线的末端开始划线的原因——划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。01稀释涂布平板法02将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。03在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落,即为纯培养物。系列稀释操作70%的酒精涂布平板操作步骤取菌液滴加到培养基表面案例:大肠杆菌的分离和纯培养微生物实验室培养的基本操作程序器具的灭菌(2)培养基的配制培养基的灭菌(4)倒平板微生物接种(6)恒温箱中培养菌种的保存2、大肠杆菌的分离和纯培养步骤制备牛肉膏蛋白胨培养基配制培养基:计算称量;熔化;调PH;分装;灭菌;倒平板接种:平板划线法;稀释涂布平板法。培养:倒置,37℃恒温箱,12和24h。纯化培养:倒置,37℃恒温箱,24h。菌种保藏:临时、长期保存法。菌种的保存临时保藏:接种到固体斜面培养基,菌落长成后置于4℃冰箱保存。长期保存:甘油冷冻管藏法20℃冷冻箱保存专题一微生物培养技术微生物非细胞生物:病毒原核生物:细菌、放线菌、支原体、立克次氏体真核生物:真菌(酵母菌、霉菌)03040201菌落1、概念:单个或少数微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度,就会形成一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群体,叫做菌落。2、菌落是鉴定微生物的重要依据:不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般具有稳定的特征,如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等。细菌的菌落特征因种而异细菌菌落如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构真菌:酵母菌和霉菌青霉(3项技术1个案例)01培养基配制技术02无菌技术03接种技术案例:大肠杆菌的分离和纯培养04一、微生物的分离和纯培养(一)无菌技术1、概念:无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒;②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌;④实验操作时,应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行——酒精灯的火焰旁的局部高温使微生物难以生存消毒定义:使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min,日常生活常用01巴氏消毒法:70-75℃下煮30min或80℃下煮15min,适用于不耐高温的液体,如牛奶。02化学药剂消毒法:用酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源03射线消毒法,如紫外线04(2)消毒的方法:定义:使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。01灭菌02灭菌的方法:A、灼烧灭菌方法:直接在酒精灯火焰的充分燃烧层(温度最高)灼烧(迅速彻底)适用范围:接种环、接种针、金属用具(接种工
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