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斑兰叶种苗组织培养技术规程

1范围

本标准规定了斑兰叶种苗生产过程中的术语和定义、培养基制备、斑兰叶组培苗生产等方面的技术

规程。

本标准适用于斑兰叶组织培养繁殖种苗。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB15/T1939—2020文冠果组织培养育苗技术规程

NY/T391绿色食品产地环境质量

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1外植体explant

植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。外植体通常选择生长健壮的无病虫的植株

上的正常器官或组织。

3.2接种inoculation

在无菌条件下将表面灭菌后的外植体或继代、生根组培材料接入培养基的过程。

4培养基配制

4.1培养基配方

MS培养基：具体成分见附录A中的表A.1。

制备用于不定芽诱导的培养基，配方为：在所述MS培养基上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）；在不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的浓度为1.0mg/L，萘乙酸（NAA）的浓

度为0.2mg/L。

制备用于继代增殖的培养基，配方为：在所述MS培养基的基础上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和

萘乙酸（NAA），在继代增殖培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的浓度为1-3.0mg/L，萘乙酸（NAA）

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的浓度为0.2mg/L。

制备用于无菌生根的培养基，配方为：在所述MS培养基的基础上添加吲哚丁酸（IBA）和萘乙酸（NAA），在生根培养基中吲哚丁酸（IBA）的浓度为0.2mg/L，萘乙酸（NAA）的浓度为

1mg/L。

4.1培养基母液及培养基配制

按照DB15/T1939—2020执行。

4.2环境与器具消毒灭菌

按照DB15/T1939—2020执行。

5组织培养技术

5.1外植体

选取生长健康的斑兰叶嫩茎作为外植体，用中性洗涤剂洗涤外植体，以去除表面的污垢，然后去除

多余的叶片，干净纸巾吸干表面水分备用。

5.2外植体消毒

在超净工作台上，先用70%酒精浸泡30s，再用无菌水冲洗3次，每次3min。立即转入0.1%的升

汞溶液中消毒8-12min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次5min，用无菌纸巾吸干水份，得到消毒外植体。

5.3不定芽诱导

在超净工作台内，将带芽茎段接种于用于不定芽诱导的培养基；每瓶接1个外植体，分布均匀，封好瓶口后，注明品种代号、接种人员及日期等，放至培养室培养，诱导培养18-22d，得到斑兰叶不定

芽。

诱导培养条件如下：温度为26±3℃,湿度为80-90%，光照时间为14h/d，光照强度为800-12001x。

5.4继代增殖

将不定芽诱切除叶片，接入继代培养基，置于培养室培养，继代培养20-25d，得到斑兰叶丛芽。

接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距1.0cm-2.0cm。

继代增殖培养条件如下：温度为26±3℃,湿度为50-65%，光照时间为14h/d，光照强度为800-12001x。

5.5无菌生根

当继代增殖培养的斑兰叶无菌苗生长到3.0cm-5.0cm时，进行切繁，并保持每株均有一个不定芽，

接入用于无菌生根的培养基中进行生根培养15-20d，得到斑兰叶幼苗。

接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距1.0cm-2.0cm。无菌苗在培养基中的

插入深度为5mm-8mm，保持壮苗直立。

生根培养条件如下：温度为28±3℃,湿度为70-85%，光照时间为14小时/天，光照强度为800-12001x。

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5.6炼苗

幼苗生长至根长0.3cm、苗高5cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5-7d，

5.7假植

然后洗净根部培养基，移入采用64孔的穴盘，基质为泥炭土与园土，比例为5：1，浇定根水1-2次，

保持叶面湿度。保持棚内温度25-30℃,浇水遵循见干见湿原则。

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附录A

（资料性附录）

表A.1MS培养基混合母液配制表

母液名称

编号

化试名称

mg/L

扩大倍数

扩大后称

mg

母液定容体积mL

配置培养基吸取量mL/L

大量元素

A

NH4NO3

1650

40

66000

1000

25

KNO3

1900

40

76000

MgSO4·7H2O

370

40

14800

B

CaCl2·2H2O

440

100

4400